固定化漆酶对农药毒死蜱的酶促降解(5)
图1-3 漆酶对有机磷化合物VX和RVX类物质的氧化降解过程
由于分子中含有可以抗水解的P-S键，所以一般在自然环境中较难降解，从而造成环境污染。用漆酶可氧化降解此类物质具有特殊的意义，这些结果将有机磷毒剂的降解研究推到新水平。HiraiH等[30]发现云芝漆酶-HBT可有效催化杀虫剂甲氧滴滴涕(MC)氧化脱氯，产生无毒物质。赵月春等[14]研究了重金属Cd对游离漆酶和固定化反胶团漆酶修复土壤有机氯农药DDT污染的影响，结果表明，游离漆酶对土壤中DDT各组分均有不同程度降解，且均随着Cd浓度的增大而降低,，含量越高的组分降解率越高，受到Cd污染的影响也越大；当Cd浓度分别为0、0.5、1和2 mg•kg-1时，游离漆酶对土壤中DDT总量的降解率分别为50.68%、32.50%、14.92%和13.40%。
随着漆酶固定化技术的逐步成熟，漆酶在环境保护上将发挥更大的作用。
1.2.5 漆酶的固定化研究及应用进展
酶的固定化方法基本有以下四种：物理吸附法、离子交换法、包埋法、共价结合法。其中包埋法所需反应条件温和，对酶自身的结构改变较小，酶的活性损失小，固定化效率较高，被作为主要研究方法。
后来的研究表明，当以磁性聚乙烯微球作载体，戊二醛为交联剂，制定出的固定化漆酶，能够有效地在胞外参加催化反应，并且最适温度与游离酶相同，最适pH下降0.4，热稳定性，pH稳定性和贮存稳定性均较游离酶有所提高[32]。姜德生等人以戊二醛为交联剂制备了磁性壳聚糖微球[33]，其具有较好的球形形貌，表面光滑，单分散性较好，粒径分布范围窄。并且能够在最适温度下有效地重复使用。
卡拉胶，壳聚糖，聚乙烯醇和SA等是最常用的包埋介质[34] 。谢晖等人研究发现，该降解酶[4]最理想的固定化环境是在温度为4℃的条件下在30g/L的海藻酸钠溶液中4-12小时。pH值8.0，45℃时固定化酶最具活性。研究结果表明该酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,对不同环境均具有较好的耐受力,有良好的应用前景。
1.3 本论文的研究思路和内容
毒死蜱对环境的污染已经引起了国内外学者的重视，随着人们对毒死蜱的潜在危害的认识，毒死蜱残留问题日益受到重视。经过研究漆酶的固定化，及其在降解毒死蜱方面有一定的进展。近年来，对漆酶的固定化研究，国内尚处于起始研究阶段。对于固定化漆酶降解毒死蜱的也特性方面有待进一步研究。本文拟进行以下研究：
（1） 漆酶的酶学性质的研究；
（2） 确定固定化漆酶的固定化效果及影响因素；
（3） 对固定化漆酶在降解毒死蜱方面的研究，了解固定化漆酶在降解毒死蜱方面的应用价值。
第二章 漆酶酶学性质的研究
漆酶作为一种生物蛋白，对pH、温度、盐离子浓度等具有敏感性。因此，要先对漆酶的酶学性质进行研究，以方便之后利用树脂对漆酶进行固定化的实验和与固定化酶的性质相对比。
2.1 实验部分
2.1.1主要试剂和仪器
2.1.1.1 实验试剂
杂色云芝（Coriolus versicolor）漆酶（lcc1）由南京林业大学化学工程学院生物工程实验室制备提供。浓缩后分装于小瓶于-20℃冷藏。
2-甲氧基酚 （CP 国药集团化学试剂有限公司）
二水合柠檬酸三钠 （AR 南京化学试剂有限公司）
一水合柠檬酸（柠檬酸） （AR 国药集团化学试剂有限公司）
2.1.1.2 主要实验仪器
仪器名称 型号 生产厂家