固定化漆酶对农药毒死蜱的酶促降解(6)
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紫外可见分光光度计 TU-1810 北京普析通用仪器有限公司
移液枪 100-1000μL Eppendorf
移液枪 20-100μL Finnpipette
2.1.2漆酶酶活的测定方法
在3mL总反应体积中，含有2.5mmol/L愈创木酚（2-甲氧基酚）1mL，50mmol/L 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液和酶液共计2mL。
测定时先将愈创木酚和适量缓冲溶液于30℃水浴中保温3min，保温结束后用移液枪添加适量的酶液。采用时间扫描的方式，时间间隔为30s，采样数为20，在465nm处测定吸光度。
定义每分钟氧化1umol愈创木酚所需酶量为一个酶活单位（U）。
酶活计算方法：式中：
：吸光度的增量；
：测定时总反应体积（mL）；
：酶液稀释倍数；
：测定酶活时所取的酶液体积（mL）；
：反应时间的变化量；
：消光系数（ ）
2.1.3 酶活影响因素
2.1.3.1 漆酶最适反应温度
紫外可见分光光度计配备有超级恒温水浴，可在某一恒定温度下测定。利用超级恒温水浴使紫外可见分光光度计文持不同的温度，在不同的温度条件下测定漆酶酶活力。根据其酶活力的大小确定漆酶的最适反应温度。
2.1.3.2 漆酶热稳定性
将漆酶分装并置于不同温度下的恒温水浴中，于不同的时间点取样测定酶活。取出的样立即置于冰浴中，测定时在同一温度下进行根据酶活力的大小确定漆酶的热稳定性。
2.1.3.3 漆酶最适反应pH值
分别使用不同pH值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液作为酶活测定时的缓冲溶液，测定同一份漆酶的酶活力。根据其酶活力的大小确定最适反应pH值。
2.1.3.4漆酶pH值稳定性
将酶液与不同pH值的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液按一定比例混合，置于同一温度的恒温水浴中，于不同的时间点取样测定酶活，根据酶活的大小确定其pH值稳定性。
2.1.3.5不同浓度的缓冲溶液对漆酶酶活的影响
将酶液与不同浓度的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液按一定比例混合，置于同一温度的恒温水浴中，于不同的时间点取样测定酶活，根据酶活的大小确定不同浓度的缓冲溶液对漆酶酶活的影响。