1。3。5  体外抗氧化作用 7

1。3。6  抑制酪氨酸酶活性作用 8

1。4  桑叶中抑制酪氨酸酶活性的成分提取工艺优化 9

1。4。1  桑叶总黄酮的提取工艺优化 9

1。4。2  桑叶总多酚的提取工艺优化 9

1。5  本研究的目的和意义 10

第二章 试验材料和方法 12

2。1  试验材料及设备 12

2。1。1  试验材料 12

2。1。2  试验试剂 12

2。1。3  主要试验仪器及设备 12

2。2  试验步骤 12

2。2。1  以抑制酪氨酸酶活性为目标的桑叶粗提液提取工艺的优化 12

2。2。2  酪氨酸酶抑制能力的测定 13

第三章 结果与讨论 15

3。1  单因素试验结果 15

3。1。1  乙醇浓度对桑叶抑制酪氨酸酶活性的影响 15

3。1。2  液料比对桑叶抑制酪氨酸酶活性的影响 16

3。1。3  回流次数对桑叶粗提液抑制酪氨酸酶活性的影响 17

3。2  响应曲面法的试验结果 18

结论 22

致谢 23

参考文献 24

已发表的相关文章 27

第一章 绪论

1。1  前言

随着时代的进步，科技发展迅速，人们的生活水平不断提高，人们对白皙的肌肤 愈发向往，不断寻找能够对抗黑色素生成的活性物质。首先，为了能够对症下药，研 究人员通过研究发现酪氨酸酶与合成黑色素有着密切的关联。论文网

酪氨酸酶（TYR）也叫多酚氧化酶、儿茶酚氧化酶，其含有多亚基，且结构复杂， 是含铜氧化还原酶[1]，来源于胚胎神经峭细胞，是黑色素代谢和儿茶酚胺的关键酶， 酪氨酸酶在自然界中广泛存在，包括了动物、植物、微生物以及人体。酪氨酸酶有多 种催化活性，并且在生物体内可通过生化反应转化为多种酶作用于机体，如酪氨酸羟 化酶、多巴氧化酶以及 5, 6-二羟基吲哚氧化酶，黑色素生成的速度和产量会随着酪氨 酸酶的表达和活性的改变而发生变化，因此想要控制黑色素生成量就要先控制酪氨酸 酶的活性[2]。同时，酪氨酸酶也是黑素细胞分化成熟的特征性标志。

众所周知，黑色素是由酪氨酸或者 3, 4-二羟苯丙氨通过一系列的生化反应得到， 是一种广泛存在于动植物和原生生物的生物色素。同时，作为一种蛋白质，黑色素通 常聚合的方式存在于人体内的皮肤基底层的细胞中间，是一种叫做“黑色素原生物 质”的物质，也叫做“色素母细胞”，是决定人类皮肤、眼睛和头发颜色的重要因素。 黑色素先是在黑素细胞的黑素小体中合成，随后以多巴和多巴醌的形式通过一连串的 反应，从黑素细胞的树突运输到附近的角质形成细胞内，最终形成表皮的色素[3]。黑 色素通常是通过酶的催化作用得到的，一般分为两种：真黑素和褐黑素。其中，酪氨 酸酶在黑色素合成的过程中起到了关键作用。黑色素的合成量随酪氨酸酶活性增加而 增多，反之则减少[4]。酪氨酸酶的紊乱或增多会引起色素疾病如黄褐斑、雀斑、褐斑、 黑斑、老年斑甚至黑色素细胞瘤等。酪氨酸酶抑制剂对黑色素的主要作用机理为通过 抑制酪氨酸酶的活性进而阻碍黑色素的形成。已有研究证实，酪氨酸来自表皮基底层 的黑色素细胞，通过酪氨酸酶的作用使其羟化成多巴（DOPA），紧接着氧化成多巴 醌。在黑色素的形成过程中，除了酪氨酸酶是黑色素合成的关键酶以外文献综述，多巴色素互 变酶、5, 6-二羟吲哚-2-羧酸氧化酶也是最主要的生物酶。黑色素形成图见图 1-1。至今，在各种抑制黑色素形成的方法中有两种常用的抑制手段，其中，较为直接 的方法是通过一定的手段将已生成的色素从体内去除，间接的方法是通过抑制酪氨酸酶等酶的活性来阻止黑色素的生成；由于后一个方法的效果较为明显，因此，目前重 多研究者围绕抑制酪氨酸酶活性做了大量的工作，希望探明抑制酪氨酸酶活性的抑制 机理从而抑制黑色素的形成，以达到美白皮肤的效果。