目 录 IV

第一章 绪 论 1

1。1  引言 1

1。2  氨基葡萄糖 1

1。2。1 氨基葡萄糖简介 1

1。2。2 氨基葡萄糖的功能 2

1。2。3 氨基葡萄糖的合成途径 2

1。2。4 氨基葡萄糖的生产 2

1。3  欧文式杆菌简介 8

1。4  基因工程菌的构建 8

1。5  氨基葡萄糖耐受菌株的筛选 10

1。6 氨基葡萄糖合成酶简介 11

1。7  实验目的意义与内容 11

1。7。1 本课题研究的目的与意义 11

1。7。2 本研究的主要内容 12

第二章 材料与方法 13

2。1  材料与方法 13

2。1。1 培养基 13

2。1。2 主要化学试剂 13

2。1。3 主要仪器 14

2。2  实验方法 14

2。2。1 氨基葡萄糖耐受菌株的筛选 14

2。2。2 氨基葡萄糖耐受菌株基因组的提取 14

2。2。3 氨基葡萄糖合成酶基因 glms 序列的克隆 15

2。2。4 质粒的提取 15

2。2。5 质粒的酶切 16

2。2。6 氨基葡萄糖合成酶基因克隆产物的胶回收 17

2。2。7 胶回收产物的酶切 17

2。2。8 酶切产物的纯化 18

2。2。9 电泳操作 18

2。2。10 感受态细胞的制备 18

2。2。11 目的基因和质粒的连接 19

2。2。12 转化感受态细胞 19

第三章 结果与讨论 20

3。1  实验结果 20

3。1。1 菌株筛选结果 20

3。1。2 氨糖耐受菌株基因组的提取结果 20

3。1。3 氨基葡萄糖合成酶基因 glmS 序列的克隆结果 20

3。1。4 质粒提取结果 21

3。1。5 质粒酶切结果 22

3。1。6 胶回收结果 22

3。1。7 PCR 产物胶回收和质粒酶切纯化结果 23

3。1。8 转化感受态细胞结果 23

结 论 24

致 谢 25

参考文献 26

第一章 绪 论