2。4。3 固态发酵 5

2。4。4 液态发酵 5

2。5 纤维素酶的提取和酶活力的测定 6

2。6 纤维素酶的应用 6

2。7 生物法提取 DNJ 研究展望 6

第 3 章 实验材料与方法 8

3。2 实验仪器与药品 8

3。2。1 实验仪器 8

3。2。2 实验药品 9

3。3 培养基 10

3。3。1 种子培养 10

3。3。2 产酶培养基 10

3。4 酸提取法最佳条件的测定 10

3。4。1 温度对 DNJ 提取含量的影响 10

3。4。2 提取时间对 DNJ 提取含量的影响 10

3。4。3 料液比对 DNJ 提取含量的影响 10

3。5 乙醇正交实验法最佳条件的测定 11

3。6 测定方法 12

3。6。1 发酵液的酸碱度的测定 12

3。6。2 酶液中可溶性蛋白质的测定 12

3。6。3 酶液中还原糖的测定 12

3。6。4 纤维素酶活的测定 12

3。7 纤维素酶辅助提取桑叶 DNJ 13

3。7。1 纤维素酶产生菌的活化 13

3。7。2 纤维素酶产生菌培养液的制备 13

3。7。3  纤维素酶产生菌发酵处理桑叶提取 DNJ 13

3。8 液相的使用方法和 DNJ 的测定方法 13

3。8。1 样品衍生化 13

3。8。2 标准曲线的测定 14

第 4 章 结果与分析 15

4。1 DNJ 的标准曲线 15

4。2 酸法提取最佳条件的测定 16

4。2。1 温度对酸法提取 DNJ 含量的影响 16

4。2。2 提取时间对酸法提取 DNJ 含量的影响 17

4。2。3 料液比对酸法提取 DNJ 含量的影响 18

4。3 乙醇正交实验法最佳条件的测定 20

4。4 黑曲霉产酶各种因素的变化 21

4。4。1 发酵中酶液蛋白含量的变化 22

4。4。2 发酵液中还原糖含量的变化 22

4。4。3 发酵液中酶活力的变化 23

4。5  纤维素酶辅助提取 DNJ 25

致谢 27

参考文献 28

第 1 章 前言

桑是我国广泛栽植的经济作物，并且有悠久的用药历史。历代医学古籍都有记录可用 桑叶里面的活性物质医治消渴症，当代药理研究发现桑叶具有降血糖的作用，其降血糖有 效活性成分是多羟基生物碱为 1-脱氧野尻霉素。桑树中含有多种有效的活性物质。1-脱氧 野尻霉素(DNJ)含量比其他植物要丰富，DNJ 是国内外认可毒害作用非常小的物质，能够起 到降血糖的作用，DNJ 提取工艺方面的研究较少。用生物酶法提取，不使用有机溶剂，绿 色安全，对环境污染低，在较低温度下即可完成，避免因高温提取过程中 DNJ 活性的破坏。