食品中含有丰富的不饱和脂肪酸（PUFAs），但PUFAs易发生脂质过氧化反应，产生的次级氧化产物即为活性羰基物质（RCS）。代表性的RCS有丙烯醛(acrolein, ACR） 。 

丙烯醛具有反应活性，能与食品中的蛋白质等营养成分发生加成反应，引起蛋白结构变化和蛋白间交联。丙烯醛通过食物摄入进入人体后，还能与人食物中的不体内蛋白质和DNA反应，扰乱各种正常生理过程，对人体健康造成威胁。丙烯醛可以说是不饱和醛，可源于食物，环境因素和人体本身。碳水化合物，植物油，氨基酸和动物脂肪等都可以经由过程相关的化学反应天生。因而，本实验尝试利用天然植物多酚白藜芦醇来降低丙烯醛的毒性作用

    白藜芦醇（Res) 是一种自然的多酚类化合物，来自于花生等植物。是一种生抗氧化性很强的天然多酚类物质，又被称为芪三酚，是肿瘤的预防剂，也是对降低血聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管等疾病的化学预防剂。在中国植物资源丰顺，且对于植物提取物的开发有庞大的作用。Res作为天然抗氧化物，抗氧化能力强，植物体内分布非常的广泛，因此开发应用白藜芦醇有很好的结果，因而尝试了白藜芦醇对动植物油脂的抗氧化性能，白藜芦醇的氧化性本领很强，要多方面想安全性，白藜芦醇可以开发为食品尤其是油脂食品的抗氧化剂，发挥抗氧化本领，起到抑制脂质的过氧化作用，因此也可以开发白藜芦醇作为膳食弥补剂，发挥在疾病治疗方面的作用，本实验利用天然植物多酚白藜芦醇降低丙烯醛毒性的效果。

本实验我们采用SDS-PAGE电泳法与western blot法检测蛋白毒性利用大豆蛋白，研究大豆蛋白有没有保护作用，加白藜芦醇发现ACR的毒性被降低的趋势。高效液相色谱（HPLC）法检测白藜芦醇对ACR的直接清除效果等方法进行研究白藜芦醇抑制丙烯醛毒性。

2。材料和方法

2。1材料与设备

材料：白藜芦醇（99%），大豆蛋白 ，七水硫酸亚铁、维生素C、维生素E、丙烯醛、过硫酸钾、考马斯亮蓝R250、磷酸缓冲液 (PBS, 0。01M, pH 7。4)、2，4-硝基苯肼（DNPH）等实验试剂购自美国Sigma-Aldrich公司、国药集团化学试剂有限公司或上海生工生物有限公司。大豆蛋白购买于山东；SH-SY5Y的细胞购于美国ATCC公司（Manassas,VA）；蛋白羰基化检测试剂盒、anti-Acrolein抗体及相应二抗均购于美国Abcam公司。

设备：OHAUS AR224CN分析天平、BIO-RAD小型垂直电泳电泳槽、Power Pac Basic电源、Trans-Blot半干转印仪、Eppendorf Centrifuge 5430离心机、UNICO紫外分光光度计UV-2802S，Waters Alliance HPLC系统，Thermo Scientific VARIOSKAN FLASH全波长酶标仪等。

方法：高效液相色谱（HPLC）法，SDS-PAGE电泳法与western blot法。

3。高效液相色谱（HPLC）法

3。1实验步骤

ACR溶液配制：通风下准确取53。4uLACR溶液溶于40mLPBS溶液（PH7。4磷酸盐缓冲液）20Mm

受试液配制：Res:22。8mg→5mlDMSO(二甲基亚砜）

DNPH衍生：精确称取62。5mgDNPH溶液3mlMHCL加入50mL乙腈充分混合均匀用锡低密闭保存。

液相水配制：0。1%甲酸水：取999mL蒸馏水加入1mL甲酸混合均匀进行过滤后超声5min去除气泡。

流动相为乙腈,水浴1h后去除试样，按同样数量准备好跑液相的样品瓶标记好，各取0。6mLDNOH衍生液于样品瓶中，然后各取试样（水浴好的）0。1mL加入样品瓶中，混合均匀。

液相工作：HPLC分析系统由Waters2965高压泵，2998型紫外检测器及Empower pro 中文版色谱工作组成，色谱柱为YMC(150*4。6um,5um),,运行梯度为50%乙腈，50%甲酸水，进样量2uL。 检测波长：372nm 流速 1mL