图1为HPLC定量与氧化白藜芦醇对ACR的直接清除能力。数据为3个平行的平均值。
4。SDS-PAGE电泳法与western blot法
4。1实验步骤与结果文献综述
本实验需要,先准备清洗干净的八块玻璃板,用擦镜纸擦干后按说明垂直装配好电泳板。配制分离胶(配法见表3)。用5ml移液枪将分离胶注入玻璃板夹层中,注意此过程不要有气泡产生,如有气泡可用蒸馏水赶走气泡。静置约30分钟,若在分离胶与水层之间可见一个清晰地界面,表面凝胶已聚合。待分离胶凝固后,向玻璃板中继续加浓缩胶(按表4配置)加至约距前玻璃板顶端1。5cm(距梳子齿约0。5cm),迅速插入点样梳。约静置30min后待浓缩胶凝固后,小心拔去点样梳,先水洗数次,再用10倍的电泳缓冲液冲洗,最后加入电泳缓冲液,然后用移液枪注入蛋白Marker3µl,再加入样品。电泳样以上样缓冲液2ul加8ulul样品配比。
样品加好后,缓缓往电泳槽中注入电泳缓冲液,将加好的样品放入电泳槽,盖上电泳槽的盖子,选择电压 150V,接通电源,开始跑胶。溴酚蓝指示剂到达底部边缘时即停止电泳(约一个半小时)关闭电源,打开盖子,小心撬开玻璃板,凝胶便贴在其中一块板上;去上层的浓缩胶,留下分离胶。
染色,考马斯亮蓝R-250 染色20min。水洗两遍 5 min,固定30min-1h,染色 30min,脱色时间视条带颜色深浅延长,胶片放在水中保存,拍照。