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    2.1.3 丁香精油
    丁香精油(clove oil)购自上海东氏香精香料有限公司,封装于白色塑料瓶中,于冰箱中4℃保藏。
    2.1.4 病原菌与培养基
    灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)均购自中国工业微生物菌种保藏管理中心。使用灰葡萄孢霉、酿酒酵母前用PDA斜面培养基28℃培养5-7d。使用大肠杆菌、金黄色葡萄球菌前用NA斜面培养基37℃培养24h。
    大肠杆菌、金黄色葡萄球菌菌悬液的制备:把活化后的菌挑取一环接种到已装有50mLLB液体培养基的三角瓶中,在37℃、200r/min在培养24h,备用。
    灰葡萄孢霉孢子悬浮液、酿酒酵母细胞悬浮液的制备:已培养5-7d的斜面中加入3-5mL的无菌水,用接种环刮下菌,至离心管内用无菌水稀释,血球计数调至所需浓度,备用。
    营养琼脂培养基(NA)配制方法:称取33g样品,加热溶解于1000mL蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌20min,备用;LB液体培养基配制方法:胰蛋白胨10g,酵母提取物5g,NaCl10g,加热溶于1000mL蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌20min,备用;NYDB培养基配制方法:5g酵母粉,10g葡萄糖,8g牛肉膏,于1000mL蒸馏水中溶解煮沸,121℃高压灭菌20min,备用;PDA培养基配制方法:200g马铃薯去皮加水煮沸30min后用纱布过滤,于滤液中加入20g葡萄糖和20g琼脂,蒸馏水定容 至1000mL,121℃高压灭菌20min,备用或者PDA粉末40g,于1000mL蒸馏水中煮沸溶解,趁热过滤,分装,121℃高压灭菌20min,备用。
    2.2 实验方法
    2.2.1 丁香精油微胶囊的制备
    丁香精油微胶囊的制备方法参照叶琳的论文[10],并作适当修改,通过测定微胶囊粒径大小选出粒径最小的配方。具体方法是:①壳聚糖溶液的制备:100mL蒸馏水,壳聚糖1.5mg/mL,加醋酸1.5倍,超声波溶解60-70min。②精油乳液的制备:100mL蒸馏水,0.5mg/mL多聚磷酸钠,香精0.05%,0.1%,0.3%(总量),乳化剂(吐温-80)0.1%(总量),乳化40-50min。③将精油乳液装入酸式滴定管中,以4s/d的滴速滴加到壳聚糖溶液中,同时壳聚糖溶液用磁力搅拌器进行一定转速的搅拌,直至100mL的香精乳化液滴加完为止。④加入0.25g/(g壁材)的固化剂戊二醛,并用磁力搅拌器搅拌40min[11]。⑤保鲜膜封口,于4℃冰箱中保藏,备用。
    2.2.2 丁香精油微胶囊包埋率的测定
    选取上一步实验测出的粒径最小配方的微胶囊进行下面的实验。取适量丁香精油微胶囊用孔径〈150nm的滤膜进行抽滤,得固体湿微胶囊,于冰箱冷冻室中预冻24h,再于冷冻干燥机中冷冻干燥,得到固体干微胶囊粉末。
    参照李荣等[12]的方法测微胶囊的包埋率:
    ①测定波长的选择:取0.1mL丁香精油标准品,用无水乙醇定容至50mL作为丁香精油储备液。准确吸取一定量的丁香精油储备液,用无水乙醇稀释1250倍后作为丁香精油工作液。以无水乙醇为空白,工作液在200-350nm时进行波长扫描。分别再取丁香精油工作液1.0,2.0,2.5,3.0和4.0mL,用无水乙醇定容至50mL,在前面所获得的最大吸收波长(207nm)条件下测吸光度。通过吸收强度对丁香精油浓度作图,即可得到丁香精油对吸光度的标准工作曲线。
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