酶法是在等电点沉淀蛋白之前对原料进行酶处理。具有提取率高,提取时间短的优点,加之酶的相对价格便宜,可以进行大规模的生产。张超[9]等人利用酶法提取荞麦蛋白,提取率比传统方法提高了10%。
硫酸铵沉淀法利用的是铵盐对蛋白质溶解性的影响,在低浓度范围时增大蛋白质的溶解度,在高浓度范围时降低蛋白质的溶解度甚至产生沉淀。Xiaona Guo[10]等人利用硫酸铵沉淀法制备荞麦蛋白,并从中分离出抗癌蛋白。
超声因能产生增溶作用而被广泛应用于目的物质的强化提取,具有成本低、设备简单、操作容易、提取效率高和提取时间短等优点。米宏伟[11]等人利用超声技术提取荞麦蛋白,确定了最佳超声提取条件:pH8.0,超声时间15min,超声频率15KHz,液料比10:1(mL:g),荞麦蛋白提取率可达75%以上,产品纯度达到77.33%,且超声提取的荞麦蛋白分子量分布范围较常规的搅拌提取的蛋白小。
膜分离工艺主要包括浸出,离心分离,水稀释,超滤,反渗透以及干燥等工序。将萃取得到的粗蛋白母液经过超滤,水和其它小分子物质透过超滤膜,而蛋白质被截留,在没有相变的条件下实现蛋白质的分离提纯和浓缩,然后干燥可得蛋白产品。膜分离技术无需酸沉,蛋白质变性少,产品风和溶解性较好,消化率高,盐分低,色泽浅,还可回收酸溶性蛋白和低聚糖等,废水亦可循环利用,综合经济效益较好。Zhuanhua Wang[12]等人利用超滤的方法提取荞麦蛋白,并从中分离出具有结合抗原能力的24kDa蛋白质。
温敏凝胶法是将萃取得到的粗蛋白母液置于5℃环境中,加入收缩状态的聚异丙基丙烯酰胺凝胶,利用它低温(5℃)吸胀,高温(40℃)收缩的性质,吸取水、盐分和糖类等小分子物质,对母液中的蛋白质进行提纯和浓缩,然后干燥可得蛋白产品。该工艺不仅提取出了酸沉性蛋白,而且保留了酸溶性蛋白,大大提高了得率。此外由于在低温下进行,限制了微生物的生长。
1.1.3 荞麦蛋白质酶解
近年来,植物蛋白水解物的研究和开发受到越来越多的关注。植物蛋白的结构大多致密、分子量大,不易消化吸收,吸收率往往低于动物蛋白,水解植物蛋白后分子结构松散、分子量降低、易被人体的酶作用,吸收率大大提高。水解蛋白质一般采用酸法、碱法,也可实现蛋白酶的催化作用。酸和碱水解蛋白质已有超过一百年的历史。酸或碱水解会损害蛋白质中的氨基酸,。酸或碱法水解会破坏蛋白质中的L-型氨基酸,使其形成D-型氨基酸,使氨基酸消旋,无生物利用价值,而且产物复杂,蛋白质的营养价值损失严重。酸法反应强烈,水解完全,但酸水解,设备腐蚀严重,在高温条件下的色酸氨完全破坏,已被淘汰。与酸、碱相比,酶法水解法具有效率高、条件温和、安全可靠等优点,在营养物质保持方面具有不可替代的优势。用于蛋白质水解的酶通常是一种蛋白酶。从它的来源,它可以分为动物蛋白,植物蛋白酶和微生物蛋白酶。微生物的蛋白酶活力较高,可通过工业生产获得,具有价格低廉的优点。目前常用的微生物蛋白酶有碱性蛋白酶和中性蛋白酶。
水解度(Degree of hydroLysis,DH)定义为:DH = h/htot*100 %,式中h:水解后每g蛋白质的肽键毫摩尔数(mmoL/g),即原料蛋白质中肽键被裂解的百分数,表示蛋白质被酶催化水解的程度。htot:对于某一特定的蛋白质来讲是一个常数,它可以由组成该蛋白质的氨基酸的含量计算出。例如对于大豆蛋白其htot=7.8mmoL/g,所以只要测出水解后蛋白质被裂解的肽键数(h值)就可以计算出相应的DH值。由于每裂解一个肽键就新生成一个—NH2和一个—COOH所以只要定量的测出蛋白质水解后的新生成的—NH2、—COOH就能求出h值[13]。源-自/优尔+文,论^文'网]www.youerw.com