在测定前,按照BCA Reagent A:BCA Reagent B=100:1的比例混匀后配制成工作液。例如如果配置30ml的工作液,则在30ml的BCA Reagent A需加入0.3ml的BCA Reagent B后,充分振荡摇匀。
1.1.3实验仪器
天平、移液枪、离心管、超声仪、离心机、微孔板、水浴锅、酶联免疫检测仪
1.2实验方法
1.2.1样品的采集、脱壳、磨粉
将编号为GP和H602的两个亲本通过自交后得到124种大麦子代。将这126份大麦进行果实采集,烘干之后装袋编号。然后对126份大麦进行脱壳处理,最后用磨粉机将这126份大麦碾磨成粉,装在封口袋并编号后放在通风处保存。
1.2.2样品的检测
采用酶标仪测定BSA标准品溶液的吸光值制作标准曲线及蛋白质含量的测定:将大麦粉进行处理之后,采用酶标仪法来测定大麦籽粒中蛋白质的含量,利用酶联免疫检测仪来进行测定。
1.2.3样品蛋白质的提取
1)样品称取:称取60mg样品于2ml的离心管中,加入600ul的裂解液,充分震荡摇匀。
2)样品超声:将样品放置在超声仪器中超声40min,使蛋白质更加充分溶解。
3)样品离心:将超声完的样品进行离心处理,转速为120000r/min,时间为30min。
4)蛋白质的提取:用移液枪将离心完的样品上清液提取出来,移取到1.5ml的离心管中备用(如中途等待时间过长,可放置在冰箱中保存)。