3.结果 10

3.1 PsHsp70的序列特征 10

3.2 PsHsp70在食用甲鱼组织中的过量表达 11

3.3 PsHsp70过表达对食用甲鱼免疫能力的影响 11

3.3.1 PsHsp70过表达对食用甲鱼死亡率的影响 11

3.3.2 PsHsp70过表达对食用甲鱼溶菌酶活性的影响 12

4.结论 13

参考文献 13

1.引言

食用甲鱼是在中国广泛分布的代表性变温动物，由于其具有较高的商业价值而被广泛的人工养殖。如今食用甲鱼的生存率很大程度上受到养殖环境特别是温度和水质的影响。养殖的最坏结果就是疾病的爆发。当养殖环境的水质受到污染或其他因素影响时，正常的水生微生态平衡遭到破坏可产生致病菌。食用甲鱼的免疫力甚至其生存都受到了孵化温度的影响[1]。如同其他变温动物一样食用甲鱼的体温受到环境温度的影响，导致生理学生化反应速率以及生物分子的稳定性发生改变[2-7]。依据IPCC2013的报告数据可知全球气候变暖是一个大的趋势，由于环境温度影响着变温动物的生长孵育，所以我们的研究焦点将集中在热适应的内在机制上。可控的实验室生理学研究表明热激蛋白与气候变暖和动物的生存有着密切的联系[8-10]。

Hsp70，首次在果蝇中发现并报道，是生物适应环境中的温度变化的重要因子。研究表明，热激蛋白不仅对温度的变化产生应答，而且对生物生存的周围环境的刺激作出反应，例如重金属，感染，无机物污染的变化[11]。属于热激蛋白家族的Hsp70在进化过程中异常保守，起到了压力感应标记物和分子伴侣的作用，在有害的环境中保护细胞免受伤害，并提高生物体的耐热性。在极端环境中被诱导的Hsp70可以保护细胞，参与从蛋白跨膜转运到凋亡的调控。结构上，Hsp70具有高度保守的氨基酸序列，包括3个功能域：包含一个N端高度保守的44kDa ATP结合域，其中含有ATP结合位点，具有ATP酶活性；一个25kDa的C端结构域组成，C端存在一个保守的15kDa的底物结合域；一个不保守的靠近C末端10kD可变区功能域,形成一个盖状结构。Hsp70的功能基于底物的结合与释放，Hsp70结合与释放底物蛋白是一个ATP依赖的过程，热激因子通过识别热激元件调节Hsp70的表达[12]。

作为一个生物标记物质，Hsp70同其他热激蛋白家族的成员一样可以对周围环境作出反应[13-16]。最近的研究表明Hsp70同人类的天然免疫密切相关[17-18]。Hsp70具有很强的免疫原性，同时参与抗原的加工与递呈，主要是通过增加主要组织相容性复合物因子的稳定和表达。在癌症细胞中，由Hsp70作为分子伴侣的肿瘤相关[19-20]，多肽可能致使抗肿瘤t细胞免疫的活化[21]。Hsp70可作为临床指标，可能用于癌症的治疗，甚至可能开发成为抗肿瘤疫苗。Hsp70也与免疫密切相关，已有研究表明Hsp通过结合抗原肽形成多肽复合物激发机体的特异性免疫反应，一定条件下膜结合Hsp70可激活机体非特异性免疫。由于Hsp家族具有很强的免疫原性，在机体受到病菌感染时可产生免疫原性，作为免疫系统的主要靶分子。

本次实验所选用的感染致病菌是水体中的常在菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophilia）[22]，其在现代高密度养殖和加温（28-30℃）饲养条件下，繁殖能力最佳，致病性增强，是导致鳖病的主要致病菌[23]。食用甲鱼嗜水气单胞菌感染的临床病型有多种，例如局部感染为主的皮肤溃疡、疖疮等，腹底板瓷白色为特征而出现了白底，而更多见且危害又最严重的是急性出血性败血症[23]。通过研究机体Hsp70对嗜水气单胞菌感染的响应对食用甲鱼疾病的防止具有重要意义。论文网