溶解的咖啡酸和氢氧化钠在HMPA,搅拌1h,然后加入2苯基乙烷/ HMPA混合,在室温下反应52h。将液体倒入冰水中,从乙醚中提取,经稀盐酸洗涤,干燥,蒸馏,色谱柱柱纯化,产率可达70%[13 14]。
(5) Wittig —Homer法
在乙醚或乙基乙烷中溶解了磷酸酯和3,4羟基苯甲醛,并在室温条件下进行反应,剩余液体通过真空蒸馏获得收率。在 40%一50%之间[12]。
(6) 生物合成法:
利用生物酶法合成 CAPE ,利用南极假丝酵母脂肪酶 B的催化作用,在一定条件下通过酯化反应将咖啡酸和苯乙醇合成 CAPE
1。4。1 CAPE的药理作用
(1)保肝作用
蜂胶的保肝作用主要体现在抗氧化和抗炎两方面:抗氧化作用:氧化应激是肝损伤的一种重要机制,它可以促进肝组织氧化物和抗氧化损伤的动态平衡。抗炎效果:级联放大作用是炎症因子导致肝脏损伤的一个核心过程。肿瘤坏死因子水平与肝病严重程度呈正比。肿瘤坏死因子可激活肝脏内皮细胞、NF_ κB促使各种炎性基因表达,诱导黏附分子产生,从而形成复杂的炎性因子网络,促进肝脏损伤及肝纤维化的发展。CAPE是一个特异NF_ κB抑制剂,它可经抑制NF_ κB途径降低胃溃疡组织因子的表达,从而缓解肝脏炎症反应,调节细胞凋亡。
(2) 抗肿瘤作用
CAPE及其衍生物具有抗肿瘤的活性,从而能抑制肿瘤细胞生长,对癌细胞也有破坏作用,并且CAPE对肿瘤细胞有其特定的破坏作用。有人发现CAPE有诱导自然细胞死亡的作用,同时也对恶性的病变组织有细胞毒性作用。通过实验发现,CAPE能有效地抑制外来的致癌物质进入体内,也可减少皮肤癌病发几率。研究表明,CAPE对一些肿瘤细胞有较好的抑制作用,作用效果是分别抑制DNA、RNA和蛋白质的合成。国内外研究表明,蜂胶中的CAPE对结肠癌和胃癌细胞等的作用非常强烈,从而表现出抑制癌细胞的特性。研究表明,CAPE的抗癌作用,有可能来自于其代谢产物咖啡酸。这个化合物细胞膜渗透性低,用CAPE这种亲油性乙醇酯化容易得到,CAPE在细胞内能加水分解,从而产生咖啡酸,咖啡酸来抑制细胞生长。咖啡酸(CA)另外对癌细胞的作用,提高了对化学疗法药物的疗效,这一作用特别在多剂抵抗性的癌细胞方面发现特异[18 19 20]。
(3) 抗菌作用
咖啡酸苯乙酯及其衍生物对细菌的生长有抑制作用。分别对3个不同地区出产的蜂胶中的CAPE的抑菌活性进行研究,结果表明CAPE对革兰氏阳性菌的抗菌作用较强,CAPE为主要的抑菌成分。经细菌培养实验可见,CAPE具有抑制乳酸菌菌株的生长繁殖,但对绿脓杆菌的生长没有明显抑制效果[16]。
(4) 抗氧化作用
CAPE 结构中含有儿茶酚结构 ,有清除自由基及抗氧化的能力,是一种强的抗氧化剂[16]。通过Sudina[17] 实验可以证明,10微米的CAPE就能把中性粒细胞中活性氧化物质的产生阻断完全,还能把黄嘌呤氧化酶系统阻断。通过研究的发现,蜂胶的主要的抗氧化组分是CAPE、咖啡酸、高良姜和咖啡酸肉桂酯等,研究发现含有CAPE的蜂胶比不含CAPE的蜂胶的抗氧化活性强一些,并且CAPE的活性还比高良姜的抗氧化活性高,这就说明CAPE具有抗氧化作用。通过CAPE对烧伤的大鼠血清中脂质的过氧化物的研究发现,CAPE能清除活性氧化物质,还能抑制黄嘌呤氧化酶和NOS的活性从而减少SOD的消耗,起到抗氧化作用。通过研究蜂胶提取物对大鼠急性肾损伤的抗氧化活性表明, CAPE的抗氧化活性甚至优于VE有报道还指出CAPE的抗氧化机理主要是:通过抑制脂质过氧化、氮氧化反应,从而降低活性氧(ROS)的生成,能保持细胞膜的流动性,进而使其起到抗氧化的作用[17]。文献综述