但是,在小麦、大麦等同属冷季型禾本科植物的麦类主要农作物中却未曾发现这些内生真菌[4]。鹅观草属植物(Roegnaria spp。)为多年生禾本科草本植物,大部分分布于北回归线以北的亚洲绝大部分地区,在欧美亦有少量分布,是小麦的近亲,从中发现了有子座Epichloë 属内生真菌和无子座的Epichloë 属内生真菌[11-13]。虽然这些内生真菌在鹅观草中的分布极为广泛,但它们对宿主植物的表型,生理生态等各方面会产生何种影响尚未受到人们的广泛关注。论文网
近年来,对于鹅观草中内生真菌的研究已经开始从资源探索转向内生真菌对宿主植物的影响。前期研究中,我们发现鹅观草内生真菌在室内盆栽条件下促进了幼苗的生长与分蘖[14]。但是对于内生真菌在田间条件下又会给宿主鹅观草植株产生何种影响,迄今还没有明确的结论。同时,我们检测到Epichloё sinica 菌株在体外最小培养基(MM)培养时可以产生IAA,并证实E。 sinica 菌株自身完全能够de novo合成3-吲哚乙酸(IAA)[15]。但是对于内生真菌是否在植物体内仍可以合成IAA,对植物体内IAA总量产生何种变化,从而对宿主鹅观草的生长又产生了何种影响,至今仍无定论。
本研究收集含有内生真菌的鹅观草植株的种子,通过种子热处理除菌的方式构建了一个EI/EF鹅观草体系(EI指含内生真菌的鹅观草,EF指不含内生真菌的鹅观草)。研究内生真菌在田间对宿主植物学特征的影响,并监测其生长过程中植物体内IAA含量的动态变化情况,以期探究E。 sinica 菌株促进宿主生长的机理。
1材料与方法
1.1 田间实验
1。1。1 种子选取
选取实验室保存的从同一植株中采集的含内生真菌E。 sinica 的鹅观草种子,其中一半放置于50℃温箱中处理24h,去除种子中的内生真菌[16],建立EI/EF鹅观草体系。
1。1。2 种子的发芽和幼苗栽培文献综述
在培养皿中垫上两层滤纸,加入适量蒸馏水,制成湿室。将鹅观草种子用75% 乙醇浸泡 2min,1% NaClO 浸泡1 min。简单消毒后,用去离子水冲洗数次,再播种( 每皿 50粒,保证胚芽向上) 。置于25℃的培养箱中催芽,注意每天换水。等种子露白之后,将其播于装有营养土的小盆中( 5 cm×5cm) 中,置于室内育苗。当幼苗高度超过5cm后放于室外炼苗 1 周,2016年10月初,选择各70株健苗移栽至试验田(南农牌坊基地)并用标牌编号。使株距与行距保持为25 cm。
植株移植后,每周浇水3次,提高幼苗的存活率。等到确保其成活后,就无需再灌溉,依靠自然降水即可。如遇干旱天气,可适当进行灌溉。前几个月每月进行1~2次的除草和松土。从3月份起,除草频率为每周一次。
1。1。3植物学特性调查和统计分析
去除意外受伤等不正常的植株,EI/EF各选取20株每月统计一次分蘖情况。观察植株生长状况,于5月2日进行形态学检测,测量指标包括株高、茎秆直径、叶宽、成穗分蘖。采用直接计数的方法测定成穗分蘖数;叶片宽度为旗叶最宽处的宽度;株高为植株最高点距地面的垂直距离;茎秆直径为旗叶下的茎杆的直径。使用 SPSS 18。0,通过独立样本T检验对数据进行统计分析。
1.2 分蘖节的切片观察
1。2。1材料选取
在苗期,第三片叶全展开后,选取茎基部的分蘖节制片
1。2。2固定
将分蘖节分别放入两支装有固定剂FAA(75%酒精90 mL+冰醋酸 5 mL+甲醛5 mL)的试管中,再放入真空抽气泵中抽气30 min后,之后静置固定24 h 左右。
1。2。3脱水、透明和渗蜡