1。2 研究意义和技术路线

1。2。1 研究的目的及意义文献综述

绿色光合细菌捕光天线绿小体的被膜上存在的小分子量蛋白质CsmA，CsmM，CsmN，CsmP，CsmO，CsmY等几种色素蛋白复合物的结构和功能以及它们在绿小体的光能传递过程中的作用方式和机理尚待阐明。本研究从克隆相关的基因入手，利用分子生物学和蛋白质化学方法来研究其中的CsmP基因的克隆，为研究该基因异源表达的蛋白质提供可靠依据，从而为深入研究此类膜结合蛋白的结构与功能打下坚实的基础。

1。2。2 实验设计思路

    首先，本实验将运用生物信息学分析方法，从已完成测序的JGI全基因组中找出目的基因序列，对基因和翻译产物蛋白的基本性质进行软件分析，从而设计特异性引物对其进行PCR扩增，还采用新方法进行双标签质粒的构建：以CsmP纯化产物以及sGFP纯化产物为模板，结合设计出的特异性引物进行PCR，目的基因CsmP基因通过一段特殊的酶切位点与sGEP基因相连接，克隆出的目的片段切胶回收后与具有高克隆效率的载体pEASY-E2连接，从而完成双标签质粒的构建。之后再转化正确的重组质粒到高效载体Trans1-T1中，进行质粒的扩增，通过菌液检测以及对检测结果正确的菌液进行测序，获得正确的克隆体。本实验所得结果将为后续的绿色光合细菌捕光天线小分子量蛋白CsmP的表达、纯化、结晶等实验与研究提供可靠的基础，也为其它类似蛋白质的研究提供借鉴。