野生型本氏烟(Nicotiana benthamiana);转GFP基因的本氏烟16c由杭州师范大学植物RNA信号传导中心主任洪益国教授提供;大肠杆菌(Escherichia coli)DH5a,农杆菌菌株为LBA4404均为本实验室保存。文献综述
克隆载体 pEASY-B 购自 TransGen公司。
2。 分子生物学试剂
EcoRI-HF、BamHI、HindIII等限制性核酸内切酶购于NEW ENGLISH BIOLABS; DNA Marker、T4 DNA polymerase、高保真 DNA 聚合酶、dNTP Mix、T4 DNA连接酶等试剂购于TARAKA;Agar B购于生工;2x Taq MasterMix购于康为世纪;Agrose购自BIOWEST;酶切产物回收试剂盒QIAquick Gel Extraction Kit、PCR产物回收试剂盒High Pure PCR Product Purification Kit、质粒抽提QIAprep Spin Miniprep Kit购于QIAGEN。
图1。 用于克隆构建的植物双元载体pCAMBIA2300
图2。 狗尾草花叶病毒(Foxtail Mosaic Virus, FoMV)的VIGS载体的示意图,
pFoMV-sg是pFoMV-wt衍生物,其包含170bp FoMV CP亚基因组启动子的重复,以及多个克隆位点(HpaI,MluI,XhoI ,和AscI)