摘要：白草花叶病毒（Pennisetum mosaic virus, PenMV）是导致我国玉米矮花叶病的病毒之一。本课题以玉米原生质体和本氏烟表皮细胞为工具研究PenMV VPg蛋白的亚细胞定位。从PenMV全长侵染性克隆中扩增得到VPg，并将其构建到植物瞬时表达载体，然后分别在玉米原生质体和本氏烟表皮细胞中进行瞬时表达以确定其亚细胞定位情况。实验结果表明PenMV编码的VPg蛋白在玉米原生质体和本氏烟表皮细胞中均定位于细胞核与细胞质。81761

毕业论文关键词：白草花叶病毒；VPg蛋白；植物表达载体；亚细胞定位

Study on subcellular localization of VPg protein encoded by Pennisetum mosaic virus

Abstract：Pennisetum mosaic virus (PenMV) is one of the agent that reults in maize dwarf mosaic disease in China。 In this study, the subcellular localization of PenMV encoded VPg protein was determined by using maize protoplasts and epidermal cells of Nicotiana benthamiana as the tool。 The VPg was amplified from the full length infectious clone of PenMV  and cloned into the expressing vector。 Then the VPg was transiently expressed in maize protoplasts and Nicotiana benthamiana epidermal cells to determine its subcellular localization。 。 The results showed that the VPg protein of PenMV is located both in the nucleus and cytoplasm in maize protoplasts and Nicotiana benthamiana epidermal cells。

Key words: Pennisetum mosaic virus; VPg protein; plant expressing; vectorsubcellular localization

目录

摘要 1

关键词 1

Abstract 1

Key words 1

引言 1

1  材料与方法 2

1。1 实验材料 2

1。1。1 供试菌株与质粒 2

1。1。2 培养基 2

1。1。3 试验试剂 2

1。1。4 试验器材 2

1。2 实验方法 2

1。2。1 植物表达载体的构建 3

1。2。1。1 PrimeSTAR的PCR扩增 3

1。2。1。2割胶回收PCR产物 4

1。2。1。3酶切 4

1。2。1。4目的片段与载体连接 4

1。2。1。5连接产物的热激转化 4

1。2。1。6筛选阳性克隆菌落PCR 5

1。2。1。7提取质粒验证 5

1。2。2大抽提质粒 6

1。2。3聚乙二醇（PEG）介导的玉米原生质体转化 6

1。2。3。1制备玉米黄化苗 6

1。2。3。2相关溶液配制 6

1。2。3。3玉米原生质体制备与PEG转化 7

1。2。4农杆菌浸润本氏烟 7

1。2。4。1农杆菌电击转化 7

1。2。4。2农杆菌预处理 7

1。2。4。3农杆菌浸润烟草叶片 8

2  结果与分析 8

2．1  pAN581-VPg-YFP载体构建