1。2 褐飞虱海藻糖、糖原、葡萄糖含量的测定
每个处理及对照各取8~10头七日龄褐飞虱成虫,装入Ep管,加入200 μl PBS后超声破碎30 min。破碎后加入800 μl PBS,4℃,1000×g离心20 min。取350 μl上清备用(用于海藻糖酶活性测定),剩余上清用于总蛋白浓度、海藻糖浓度、葡萄糖浓度和糖原浓度的测定。
1。2。1实验组和对照组褐飞虱海藻糖测定
将40 mM的海藻糖溶液用PBS稀释为1。6、0。8、0。6、0。4、0。2、0。1、0。05 mM的标准液,制作标准曲线;取10 μl标准液和各组上清液,每组做3个重复,分别加入 10 μl 1%H2SO4,90℃水浴10 min,冰水浴3 min;再加入10 μl 30%KOH,90℃水浴10 min,冰水浴3 min;然后加入200 μl显影剂(0。02 g蒽酮加10 mL 80%H2SO4),90℃水浴10 min,冰浴冷却,用紫外可见分光光度计测A630;利用标准曲线计算出海藻糖浓度。