富氢水对油菜幼苗耐盐性的影响及其机理研究(2)
经过国内外无数科研工作者多年的辛勤工作，许多植物抗盐机理已经从生化、细胞、分子等多个角度被阐明。盐胁迫对植物的危害主要体现在对植物发育及种子萌发的影响[10]、对光合特性及叶绿体特性的影响、对生理代谢及细胞膜透性的影响、对细胞膜脂过氧化的影响、对渗透物质的影响、对抗氧化系统的影响优尔个方面[6]。同时，也发现了许多对植物盐胁迫有缓解作用的外源物质[7]。研究表明，有机物如CPPU（N-苯基-N’-(2-氯-4-吡啶基) 脲）[8]、DCPTA（2-（ 3，4-二氯苯氧基） -乙基-二乙胺）[9]、胺精胺（Spm）、亚精胺（Spd）[10, 11]、AsA（抗坏血酸）[12]、甘露醇和山梨醇等[13]，无机物如Ca2+[14]、氯化镧[15]、硅[16]、CO[17] 等都有明显的缓解植物盐胁迫的作用。有实验证明，富氢水是一种优质的抗氧化物质，并且在动物实验中已经被证明具有缓解因氧化作用产生的各种疾病的功效，在植物学方面，也有实验证明富氢水能较为有效的缓解非生物胁迫对植物生长发育的影响[18, 19]。
本课题采用正常培养的油菜幼苗为对照、与盐处理的油菜幼苗、富氢水处理的油菜幼苗、盐和富氢水共同处理的油菜幼苗进行比较实验，观察幼苗生长发育情况，测量幼苗的生理生化指标，对比实验数据，得出富氢水是否可以缓解油菜幼苗的盐胁迫的结论并解释其中可能的机理。
1 材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 植物材料
浙江省农业科学院作物与核技术利用研究所选育的浙油51（浙审油2014001、国审油2013017）
1．1．2 Hoagland培养液
按硝酸钾506 mg/L、四水硝酸钙945 mg/L、硝酸铵80 mg/L、磷酸二氢钾136 mg/L、硫酸镁493 mg/L、铁盐溶液2.5 mL/L、微量元素液5 mL/L配置Hoagland培养液，调pH=6.0。其中铁盐溶液：七水硫酸亚铁5.56 g/L、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）7.46 g/L，调pH=5.5；微量元素液：碘化钾0.83 mg/L、硼酸6.2 mg/L、硫酸锰22.3 mg/L、硫酸锌8.6 mg/L、钼酸钠0.25 mg/L、硫酸铜0.025 mg/L、氯化钴0.025 mg/L。
1．1．3 富氢水培养液
将机制氢气通入Hoagland培养液中，直至饱和即为100%富氢水培养液，用100%富氢水培养液与Hoagland培养液按不同比例混合即可制成不同富氢水浓度的富氢水培养液。
1．1．4 盐培养液
将一定量的NaCl加入Hoagland培养液或富氢水培养液中即可制成不同盐浓度的盐培养液。
1．2 实验方法
1．2．1 材料的萌发及培养
油菜种子用75%的乙醇消毒5分钟，用水洗净后放入水中浸种24小时，平铺在白瓷盘子中潮湿的卫生纸上放入25℃培养箱中萌发三天。萌发后转移至有蛭石的白瓷盘中浇灌Hoagland培养液继续培养几天，选取生长情况一致的幼苗移至盛有Hoagland培养液的小杯中水培法继续培养，需每天更换培养液。
1．2．2 筛选富氢水浓度和盐浓度
待油菜幼苗长至两叶一心时，分别换用富氢水浓度为0%、50%、100%，NaCl浓度为0 mmol/L、50 mmol/L、100 mmol/L、150 mmol/L、200 mmol/L、300 mmol/L的培养液培养，共18组每组3个重复，需每天更换培养液。待油菜幼苗长至四叶一心时，观察其表型并取幼苗分别称量其鲜重（FW）和干重（DW），根据油菜的表型和数据选择合适的富氢水浓度和盐浓度继续后面的实验。
1．2．3 富氢水和盐处理幼苗
另培养一批新的油菜幼苗，待油菜幼苗长至两叶一心时，开始处理。根据前面实验结果，选择采用50%富氢水浓度和100 mmol/L的NaCl浓度进行实验。将生长情况一致的幼苗分为4组，每组18个重复，以后第一组继续用Hoagland培养液培养，第二组换用含有50%富氢水的Hoagland培养液培养，第三组换用含有100 mmol/L NaCl的Hoagland培养液培养，第四组换用含有50%富氢水和100 mmol/L NaCl的Hoagland培养液培养，需每天更换培养液。