基于磁珠分离技术的氯噻啉上转换荧光免疫分析方法的研究(2)
2.4 特异性分析（交叉反应） 8
2.5 基质效应评价 9
2.6 添加回收率测定 10
2.7 准确性分析（与HPLC相关性比较） 11
3 讨论 11
致谢 12
参考文献： 13
基于磁珠分离技术的氯噻啉上转换荧光免疫分析方法的研究
引言
氯噻啉是江苏省南通市江山农药化工股份有限公司自行研制开发的一种新烟碱类杀虫剂，是一种作用于烟酸乙酰胆碱酯酶受体的新烟碱类内吸性杀虫剂，广泛应用于广泛应用于水稻、小麦、蔬菜、烟草、果树、茶树等作物上刺吸式口器害虫的防治，如蚜虫、叶蝉、飞虱、蓟马、粉虱及其抗性品系，同时对鞘翅目、双翅目和鳞翅目害虫也有防效，尤其对水稻二化螟、三化螟的毒力比其他烟碱类杀虫剂高，，具有高效、光谱、低毒等优点。近年来，随着氯噻啉杀虫剂的广泛使用，其消极影响也越来越明显[1]。
目前，对氯噻啉残留的检测主要依赖高效液相色谱法(HPLC)。贺敏等[2]建立了水稻中氯噻啉残留的分析方法，在稻田水、茎叶、稻壳和土壤中的最低检测浓度分别为0.0004、0.01、0.02和0.005mg/kg；张丽芬[3]建立了甘蓝中氯噻啉残留的分析方法，其最低检测浓为3.2 mg/kg。仪器检测方法有稳定性好、灵敏度高、检测限低的优点，但是仪器检测方法耗时耗力，因此很难实现实现单次大批样品的检测，并且对仪器、操作人员技术要求高。因此开发高效、快速、灵敏的检测方法显得十分必要。农药残留的快速检测方法有很多，其中免疫学技术近年来发展较快，应用十分广泛。免疫学技术有快速灵敏、特异性强、分析容量大、安全可靠的特点，非常适宜于复杂基质中痕量组分的分析和现场快速检测[4]。方松、洪霞等[5,6]基于氯噻啉抗体分别建立了氯噻啉间接竞争酶联免疫分析方法（ic-ELISA）和时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）。
其中，荧光标记分析检测技术由于其特定的优势受到广泛重视，并在近些年的研究中取得迅速发展。随着荧光标记技术的发展，突光探针备受关注。上转换荧光材料（UCNPs）是一种新兴的荧光标记物，它拥有许多优点，如毒性小、化学性质稳定、无背景荧光干扰等[7]。结合磁性纳米材料（MNPs）和UCNPs在分离富集效应和光学性质上各自的优势，以此为基础进行荧光免疫分析，实现对氯噻啉的检测。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 主要试剂
氯化铁（FeCl3•6H2O） 上海麦克林生化科技有限公司
乙二醇 上海麦克林生化科技有限公司
无水醋酸钠 上海麦克林生化科技有限公司
1,6-己二胺 上海麦克林生化科技有限公司
牛血清白蛋白（BSA, 98.0%） 北京索莱宝科技有限公司
戊二醇（25%） 国药集团化学试剂有限公司
氯噻啉抗原、抗体以及氨基功能化UCNPs在实验室内制备
其他常规化学试剂均为分析纯试剂
1.1.2 主要仪器
H-7650 透射电子显微镜 日本Hitachi公司
F-2700 荧光分光光度计 日本Hitachi公司
980nm激光源
Vector-22 FTIR分光光度计 德国Bruker公司
D8 Advance X射线衍射仪 德国Bruker公司
超水波水浴锅
VM-03U漩涡混合器
MS-12磁性分离器