外源钙对梨石细胞形成及不同形态POD的影响研究
梨是世界上重要的落叶果树。在我国,梨是一种大面积种植的果树,梨果品产量稳居于世界第一。梨树在我国栽培的历史悠久,是我国第三大果树,产量和面积均居世界首位[1],因为其多汁清甜的独特风深受人民喜爱。随着经济的快速发展,人们对果品口感的要求也在不断提高,而梨石细胞对其加工工艺以及鲜果品质的影响非常关键[2]。生产中常常用叶面喷施氯化钙的方法降低石细胞含量。梨石细胞是一种强烈木质化的细胞,POD则被认为是植物木质化过程中的一种起重要作用的酶。
‘砀山酥梨’是我国的畅销梨品种,有果实饱满、色泽明亮、皮薄汁多的优点[3],同时也有石细胞含量过多,石细胞团较大的缺点[4]。本研究选择‘砀山酥梨’作为试验材料,通过叶面喷施不同浓度氯化钙,并以清水为对照,对石细胞含量、木质素含量、细胞质过氧化物酶活性、细胞壁结合过氧化物酶活性进行测定,以期针对梨品质下降的现实问题,提出有关梨种植方法的相关建议。
1  材料与方法
1.1    材料
以江苏省高邮市果树实验场的‘砀山酥梨’(Pyrus bretschneideri cv.‘Dangshansuli’)为实验材料,分别于盛花后开始,每隔十天,共四次对其进行0.25%、0.5%、0.75%氯化钙(CaC12)叶面喷施,以喷清水的作为空白对照,并于花后每隔七天取有代表性的果实样品进行分析,果实发育前期间隔天数较短,果实发育后期间隔天数较长,可做适当调整,并带回实验室保存于4℃冷柜备用。
1.2  方法
1.2.1  冷冻法测石细胞含量    取果肉,切成1.0cm3正方形,在-16~20℃冰柜中保存24h,解冻后,用离心机22000 r/min离心1、3、5min[5]。将离心好的果肉匀浆置入容量为1000mL的烧杯中,并加水到800mL。然后用玻璃棒搅拌充分且静置3min左右,倒出上层悬浮液。不断漂洗,直至液体清澈透明。将烧杯底部的石细胞用称量过的粗滤纸过滤。后将滤纸上的石细胞与滤纸一同放入烘箱,在60~65℃的温度下烘2h,取出,冷却直至室温,而后称量,减去滤纸的重量,精确到1mg。
1.2.2  Klason法测木质素含量    梨木质素含量测定采用Klason法。取烘干的梨果肉,研磨成均匀粉末,过筛(200目)。后用甲醇抽提,烘干,取0.2g干粉,在30℃下用15mL72%H2SO4抽提1h,加入115mL蒸馏水煮沸1h,保持总体积不变。过滤反应后的混合液,并用500mL热水冲洗,同时测量酸碱度,直至冲洗液呈中性,得到的木质素烘干后称重。
1.2.3  石蜡切片观察石细胞团    将果肉组织用FAA固定液(甲醛:冰醋酸:50%酒精=5mL:5mL:90mL)固定24小时后,进行乙醇脱水处理,而后再用二甲苯、乙醇按照不同比例对材料进行透明处理。石蜡包埋成1cm3四面平滑、材料正中的小块,用摇转式切片机切片并展片、贴片。制片完成再次用二甲苯和乙醇进行脱蜡、脱水处理。脱水步骤完成之后,采用番红固绿染色法进行染色,最后将切片放在显微镜下拍照观察[6]。
1.2.4  GPOD活性测定    以愈创木酚(Guaiacol)作为底物进行连续测定的过氧化物酶测定方法。反应体系包含磷酸钠缓冲液(10mM,pH6.4)、0.125%过氧化氢、0.2%愈创木酚及100μL酶提取液。于470nm波长下连续测定反应液吸光值3min,测量时以每分钟吸光值变化0.01为一个活性单位(U)。
1.2.5  SPOD活性测定    以丁香醛连氮(SYR)作为底物进行连续测定的过氧化物酶测定方法。参照Lee和Lin(1996)[7]的方法进行。3mL反应体系中包含0.1mL酶提取液,磷酸缓冲液(50mM,pH6.0),1.5mM过氧化氢和0.04%丁香醛连氮(SYR)。测定470nm波长下吸光值的变化。另以提取缓冲液代替过氧化氢作为空白对照,以每分钟吸光值变化0.01为一个活性单位(U)。
上一篇:外源葡萄糖对盐胁迫下黄瓜幼苗生长和抗氧化代谢的影响
下一篇:不同品种的不结球白菜中主要金属元素的测定与分析

稻田锌含量对水稻害虫褐...

甲苯二甲苯对斑马鱼幼鱼神经的毒性影响

PEG6000模拟干旱胁迫对大麦...

教育实习前后生物专业师...

小鼠皮层PV+神经元fgfr2敲除对突触蛋白的影响

重金属铬对白尾灰蜻稚虫...

对二甲苯对视顶盖HDAC1蛋白表达的影响

志愿者活动的调查问卷表

神经外科重症监护病房患...

公寓空调设计任务书

医院财务风险因素分析及管理措施【2367字】

10万元能开儿童乐园吗,我...

国内外图像分割技术研究现状

承德市事业单位档案管理...

C#学校科研管理系统的设计

中国学术生态细节考察《...

AT89C52单片机的超声波测距...