外源钙对梨石细胞形成及不同形态POD的影响研究(3)
1．2．6 细胞质及细胞壁结合POD（POD I和POD II)的提取与活性测定 参照Lee和Lin(1996）[7]及Quiroga等（2000） [8]的方法进行。准确称取l0g左右样品，加入适量磷酸钠缓冲液(50mM，pH6.0，含l0mM NaHSO3和0.1%PVPP )低温研磨，4℃条件12000g离心15min，取上清液。提取后的残渣再用提取缓冲液浸提数次，直至不再检测到POD活性，合并上清液，即为POD I，冷冻干燥浓缩并记录准确体积后进行活性测定。
将提取POD I后的残渣再次浸泡于提取缓冲液中(含1M氯化钠)，并于4℃条件下振荡过夜。4℃条件下将材料放入离心机12000g离心15min，取上清液，重复提取步骤三次，合并上清液即为POD II。将POD II冷冻干燥浓缩后装入透析袋，对磷酸钠缓冲液 (50mM, pH6.0)4℃下透析过夜并记录准确体积后进行活性测定。