大肠杆菌细胞表面展示条件的初步优化和实验分析(8)
图中显示用蛋白酶处理后重组菌的绿色荧光强度值
图6 蛋白酶处理后细胞GFP荧光强度降低的测定结果
图中结果以测得的荧光强度占初始荧光强度的百分比表示
3.2.2 诱导温度对大肠杆菌表面展示效率的影响
在0.1 mM IPTG诱导下，分别测定了15℃，20℃，28℃和37℃的诱导温度下全细胞的GFP荧光强度。结果如图7显示，各温度条件下GFP荧光强度变化不大，28℃以下均可作为后续实验的诱导温度，因此，最佳诱导温度选择在室温条件下。
图7 诱导温度与GFP荧光强度的关系
图中显示在不同诱导温度下重组菌的绿色荧光强度值
3.2.3 诱导时间对大肠杆菌表面展示效率的影响
IPTG诱导后每4 h测定一次重组菌MB l08和大肠杆菌JM l09的全细胞GFP荧光强度，结果显示(图8)，重组菌MB l08的GFP荧光强度随时间不断增加，并在24 h时达到最大，之后趋于稳定。大肠杆菌JM l09无荧光活性。从图9重组菌MB l08和大肠杆菌JM l09的生长曲线可知，融合蛋白的表达对受体菌的正常生长没有影响。
综合以上结果，在0.1 mM IPTG室温下(28℃以下)诱导24 h时大肠杆菌细胞表面展示效率达到最优。
图8 IPTG诱导时间与GFP荧光强度的关系 图9 重组菌MB108与大肠杆菌JM109生长曲线
4讨论
在IPTG浓度诱导实验中，全细胞荧光强度随IPTG浓度的提高而提高，但大于0.1 mM时，荧光强度基本不变。这可能是因为当IPTG浓度达到一定值时细胞表达的融合蛋白已趋于饱和，不再提高。此外，未经诱导的重组菌JM 109也有一定的GFP荧光活性，表明融合蛋白有渗漏表达。从展示效率来看，IPTG在较低浓度时，展示效率反而更高，这可能是由于高浓度的IPTG诱导融合蛋白的大量表达，但蛋白向外膜分泌的效率有限，导致这些蛋白积聚在细胞内部，无法顺利达到细胞外膜。
5总结
本实验针对大肠杆菌表面展示性能展开研究，主要研究结果如下：
以绿色荧光蛋白GFP作报告蛋白，对大肠杆菌细胞表面展示性能进行分析。实验证明外源蛋白能有效展示于大肠杆菌细胞表面，经蛋白酶处理后，大肠杆菌表面荧光强度降低，通过不同的IPTG浓度、温度以及培养时间诱导，得到大肠杆菌表面展示效率最优化的培养条件：在0.1 mM IPTG室温下(28℃以下)诱导24 h。
致谢
本论文是在李茜茜老师的悉心指导下完成，在整个论文的完成过程中给予了精心指导。老师渊博的知识、一丝不苟的治学态度、永不松懈的敬业精神及平易近人的作风是我一生的楷模，在未来的人生道路上将激励我勇往直前。谨此论文付梓之际，我向老师致以最诚挚的敬意和衷心的感谢。
衷心感谢微生物生物技术室成员们所营造的积极向上、力争上游的学术气氛及团结友爱、互帮互助和共同进步的精神，将另我永远怀念。尤其感谢许俊伟、张宏杰、陈天祥、叶梦雨、谢理、高祺、胡潘声等同学们的热心帮助，没有你们的支持我不会如此顺利的完成论文！对你们的鼓励和关怀致以真挚的谢意！
衷心感谢我的父母二十余年来对我的培养、教育和深深的爱。
特别感谢我的女朋友张雅聪，感谢她对我研究工作开展的支持和帮助，在这些日子里给予我的关心、支持和激励，使我顺利完成学业！
谨将此论文献给所有关心和帮助我的人！
下一篇：怀牛膝多糖提取及抗氧化活性