可得然胶多糖/壳聚糖/纤维素复合膜对草莓保鲜抗氧化酶活性的影响(4)
BS-200S电子天平（Sartorius公司）；
OHAUS 2100 pH计（美国OHAUS公司）
全温摇瓶柜HYG-A（太仓实验设备厂）。
1.2.3实验方法
配制适量固态和液态LB培养基，灭菌备用。将低温保藏的大肠杆菌菌种以1%的接种量接于LB液态培养基中过夜震荡活化培养，转速为180r/min，温度为37℃[10]。
1.2.3.1液态培养基抑菌性研究
将制备好的单纯膜、复合膜剪碎，在紫外灯下照射0.5h。
设计五组实验瓶，一组对照组，一组纯可得然膜实验组，一组纯壳聚糖膜实验组，一组可得然/壳聚糖复合膜实验组，一组可得然/壳聚糖/羧甲基纤文素复合膜， 于超净台中无菌环境下以1%接种量将活化好的大肠杆菌接种于各实验组液态培养基中，分别加入2g不同膜碎片，放入摇床培养，温度37℃，转速180r/min，每隔1h测量吸光度，观察菌体浓度差异。
1.2.3.2固态培养基抑菌性研究
将制作好的单纯膜、复合膜用打孔器打成数片直径15mm的小圆片，紫外照射0.5h灭菌备用。
预实验：无菌条件下，制作固态平板培养基，将活化好的菌种用生理盐水稀释成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等不同稀释度，涂布平板，放置37℃培养箱培养24h。
确定合适的稀释度，再次涂布平板，用镊子将制作好的圆形小膜片贴于平板，37℃培养，观察菌体生长状况[5]。
1.3复合膜在草莓保鲜中的应用
主要进行三种抗氧化酶的活性测定
1.3.1实验材料和试剂
草莓，南京市市购，品种为宁玉，选取成熟度一致且饱满的草莓作试验材料；
中粘度壳聚糖（脱乙酰度>85%，分子量为400,000Da），上海永生生物科技有限公司；
可得然多糖，日本麒麟控股公司；
羧甲基纤文素，上海永生生物科技有限公司；
NBT（氮蓝四唑）
愈创木酚
氢氧化钠、甘油（丙三醇）、乳酸、EDTA-2Na、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、甲硫氨酸、核黄素、30%H2O2、PVP（聚乙烯吡咯烷酮）等（均为分析纯），南京化学试剂有限公司。
1.3.2主要设备及仪器
BS-200S电子天平（Sartorius公司）；
OHAUS 2100 pH计（美国OHAUS公司）
4000xl日光灯光照设备
680ml中圆保鲜盒，浙江龙士达家居用品有限公司；
恒温恒湿箱CTHI-150B（施都凯仪器设备有限公司）；
紫外分光光度计UV-2450（日本岛津公司）；
全温摇瓶柜HYG-A（太仓实验设备厂）。
1.3.3实验方法
1.3.3.1草莓的涂膜处理
称取壳聚糖溶于1%的乳酸溶液中制成质量含量为2%的母液，可得然多糖溶于0.25mol/L的NaOH溶液中制成质量含量为2%的母液[7]，羧甲基纤文素溶于纯水中制成质量含量为2.5%的母液，分别取一定量壳聚糖待混膜液和可得然多糖待混膜液在55℃水浴下混合，使壳聚糖、可得然多糖、羧甲基纤文素终浓度分别为1.1%、0.55%、0.45%，用乳酸调节pH至4。加入一定量甘油使其终浓度为1.4%，磁力搅拌使其充分溶解，超声波脱气处理后对草莓进行涂膜处理。然后将涂膜好的草莓和未涂膜的草莓装入保鲜盒中，分别放在0r/min、50r/min、100r/min，21℃的摇床中各半小时，模拟草莓运输环境。然后放到RH50%，21℃的恒温恒湿箱中6天，每两天测一次生理生化指标[8]。
1.3.3.2草莓的覆盖膜处理
将实验1.3.3.2中制作的膜液 倒入聚四氟乙烯板中，90℃定型10min，RH25%、30℃干燥12h揭膜。揭膜后将膜在0.25mol/L的NaOH溶液中浸泡8min。取出后放到恒温恒湿箱（20℃，RH50%）中干燥4h[4]。
将草莓装入保鲜盒中，处理组分别膜密封。然后放到RH50%，21℃的恒温恒湿箱中6天，每两天测一次生理生化指标。
1.3.3.3三种抗氧化酶的测定
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