3。1  细胞活力试验（MTT法）结果 12

3。2  半数抑制浓度IC50值的确定 13

3。3  明场下展青霉素、拮抗酵母及其降解产物处理细胞后的状态 15

3。4  激光共聚焦对DAPI染色后细胞凋亡状态的观察 15

结论 17

参考文献 18

致谢 19

1  前言

1。1  真菌侵染是引发水果采摘后病害的主要原因之一

果实采摘后，在长期运输途中会发生腐烂和霉变。这已经是全球都面临的一个巨大难题，并且，因为果蔬保藏技术和设备的落后，这一问题在发展中国家变得尤为显著。而其中的主要原因之一是霉菌侵染果实并分泌真菌毒素。这不仅会导致生产者巨大的经济损失，而且还会造成严重的资源浪费。更重要的是，这些霉菌产生的真菌毒素还会对人体健康产生巨大的危害，其中最常见的真菌毒素是展青霉素。

1。1。1  展青霉素论文网

展青霉素(Patulin)，又叫做棒曲霉素，它的分子式为C7H6O4,分子量为154,化学名称是4-羟基-4-氢-呋喃(3,2 碳)并吡喃-2(6 氢)酮,这是一种杂环内酮结构化合物。展青霉素主要是由青霉属，丝衣霉属和曲霉属等霉菌所产生的真菌次级代谢产物。展青霉素最早在20世纪30年代，从Penicillium patulum中分离出来[1]，曾一度作为抗生素进行使用。经过几十年的使用，在1960年前后，研究者陆续发现展青霉素对动物具有广泛而强烈的毒性，具体表现为痉挛、肺肠部出血、水肿等急性中毒症状，而慢性中毒症状具体表现在致癌、致畸、致突变、存在免疫毒性和影响生育等方面。从而各国逐渐地停止了对展青霉素的临床使用[2]。

展青霉素污染在各种食品生产加工，例如橘子、苹果、葡萄、谷物和玉米中广泛存在。其中苹果以及以苹果为原料所加工出的食品受展青霉素污染尤为严重。因此很多国家在果汁及其制品中展青霉素的最大量上有很明确的限定，例如欧盟标准和美国食品药品监督管理局(U。S。 Food and Drug Administration)标准中限定在果汁中的展青霉素不能超过50μg/kg[3，15]。而我国的国标规定苹果山楂半成品最大不能超过100μg/kg，而果汁、罐头等制品的上限为50μg/kg[4,5]。中国在世界上水果生产和销售中一直处于领先的地位，其中苹果的产量已经跃居世界首位，而苹果易受展青霉素污染已成为阻碍中国苹果行业发展的一个重大难题。因此，找到减轻或者解决展青霉素污染的方法对于中国果蔬行业来说刻不容缓。

1。2  防治水果采摘后病害的方法

目前，国际上去除展青霉素的方法很多，主要分为三大类，即物理方法、化学方法和生物方法[14]。

1。2。1  物理与化学方法

物理和化学方法主要从最早的清洗、拣选，到加热、吸附，再到后来的辐照、臭氧氧化、超声处理、氨化作用、高锰酸钾氧化法、硫化处理、添加有机酸和维生素。这些方法各有利弊：其中最初的清洗、拣选、吸附只能降低展青霉素的浓度，但不能从根本上降解展青霉素。另外，清洗这一类的方法会对环境产生潜在的威胁。而辐照，臭氧等方法虽然能有效展青霉素，但是成本较高。如果使用剂量过度的话，反而对水果产品本身产生一定的毒害作用，从而不仅造成经济损失，还对人类的健康带来一定的风险。