目前用于自由基清除分析方法有比色法（邻苯三酚法、DPPH法）、化学发光法、荧光、电子自旋共振法等[6]。本实验采用高效液相色谱-DPPH/ABTS(HPLC-DPPH/ABTS)柱后衍生系统该方法基于在线联用液相色谱与众所周知的抗氧化能力测定法，使用DPPH作为合成，稳定的自由基，被目标化合物清除[6]。因此，允许测量抗氧化能力和分离的化合物的平行估计。从用于测定抗氧化活性的无数测定中，DPPH测定已经成为用于分析各种底物的抗氧化活性的颇受欢迎的方法。因为原花青素含量高达98%且抗氧化活性强，所以选择了DPPH测定法，因为它允许与大多数酚类化合物的快速反应。

1。3  高速逆流色谱法

高速逆流色谱法（high speed counter current chromatography ，HSCCC）是一种液-液分配色谱技术，利用溶质在两种互不相溶的溶剂系统中分配系数的不同进行分离。不使用支撑基质，液体固定相通过离心力固定，消除样品不可逆吸附固体基质，因此导致高的样品回收率。HSCCC作为一种高效的制备技术现已获得认可，广泛应用于儿茶素的分离纯化、低聚原花色素（opc）等来自天然植物的酚类化合物。

1。4  本实验的研究目的和意义

葡萄籽提取物因富含原花青素等抗氧化性成分而广泛应用于食品、化妆品和保健品中。本实验探索了葡萄籽提取物抗氧化活性以及HSCCC分离纯化技术的运用，对葡萄籽综合利用具有重要意义。

2  材料与方法

2。1  材料与试剂       

      试剂名称 规格 生产厂家

葡萄籽提取物 Opc>98% 西安天彬生物技术有限公司

乙醇 AR 国药集团化学试剂有限公司

乙腈 HPLC 国药集团化学试剂有限公司

甲醇 HPLC 国药集团化学试剂有限公司

三氟乙酸 AR 国药集团化学试剂有限公司

乙酸乙酯 AR 国药集团化学试剂有限公司

正己烷 AR 国药集团化学试剂有限公司

超纯水 HPLC 超纯水机

DPPH BR 梯希爱化成工业发展有限公司

2。2  仪器与设备

设备名称 型号 生产厂家

多功能酶标仪 infinite M200pro TECAN公司文献综述

台式高速冷冻离心机 Centrifuge 5810R 美国贝克曼库尔特有限公司

真空干燥机 UDK152 天津市天宇实验仪器有限公司

分析天平 BS224S 泰州市奥豪国际贸易有限公司

电子天平 BS210 Sartorius公司

超声波清洗器 KQ-3200