除草剂乳氟禾草灵降解菌株S10的分离鉴定及其降解特性研究(4)
将2管100 L含Trans 5α超感细胞在冰上分装成4管，各50 L；每管中对应加入100 L的酶连产物；冰上放置30 min；45 ℃水浴热激45 s；冰上放置2 min；加入500 L的LB液体培养基，37 ℃、150 r/min摇床培养1 h；在菌体浑浊管中取200 L于含氨苄青霉素（Amp）的LB固体培养基平板（Amp终浓度为50 mg/mL）上涂布，37 ℃倒置培养过夜。
1．5．6 质粒DNA的提取
挑取转化DH 5α后平板中的单菌（周围无卫星菌落的大菌落），采用质粒DNA提取试剂盒（上海捷瑞生物工程有限公司）提取质粒DNA，提取完毕后使用琼脂糖凝胶电泳检测，检测质粒DNA的大小为1.5 kb左右。
1．5．7 测序与分析
TA克隆后的片段进行测序（由南京金斯瑞生物科技有限公司完成）。将测得的序列用BLAST 软件与GenBank 数据库及EzBioCloud中已知的16S rDNA基因序列进行同源性的比较及分析，下载序列，使用用MEGA 7.0软件使用邻接法（Neighbor-Joining）构建系统进化树，确定菌株的分类地位。
1．6 降解菌S10的降解曲线
将菌株S10的培养液，以5 %的接种量，接种到10 mL含50 mg/L乳氟禾草灵的无机盐液体培养基中，30 ℃、160 r/min摇床中振荡培养，定时检测菌株对乳氟禾草灵的降解情况。以不接菌的50 mg/L乳氟禾草灵的无机盐液体培养基作为空白对照。
1．7 降解菌S10的降解特性研究
对分离到的乳氟禾草灵降解菌株S10的降解特性进行研究，主要测定不同影响因子（接种量、温度、初始PH值、乳氟禾草灵初始浓度、碳氮源等）的情况下菌株S10对乳氟禾草灵的降解效率的影响。
1．7．1 接种量对降解效率的影响
在装有3 mL的LB液体培养基的10 mL试管中加入乳氟禾草灵，使其终浓度为50 mg/L，分别以1 %、2.5 %、3.5 %、5 %、7.5 %的接种量接入菌株S10， 30 ℃，160 r/min摇床振荡培养。7 d后HPLC检测乳氟禾草灵的含量。