葡萄Rs基因的克隆序列分析及时空表达特征鉴定(2)
2．3．5 结构域分析 8
2．4 基因的表达特异性分析 9
2．5 葡萄皮愈伤组织的诱导与培养 9
2．5．1 不同材料愈伤组织的诱导情况 9
2．5．2 不同接种方式对愈伤组织诱导的影响 9
2．5．3 不同光照条件对愈伤组织生长的影响 10
2．5．4 受体愈伤组织的选择 10
3 讨论 10
致谢 11
参考文献 11
表1 葡萄Rs基因基本信息 7
表2 RS蛋白理化性质 7
表3 RS蛋白二级结构预测 7
表4 不同材料愈伤组织生长情况 9
图 1 植物材料 2
图 2 葡萄果皮总RNA电泳图 5
图 3 葡萄内参基因的标定 5
图 4 葡萄白藜芦醇合酶基因的PCR扩增 5
图 5 菌液、质粒电泳检测 6
图 6 基因、载体双酶切检测 6
图 7 葡萄白藜芦醇合酶基因motif分析 6
图 8 葡萄白藜芦醇合酶基因编码蛋白二级结构分布图 7
图 9 葡萄Rs基因cDNA序列和预测的氨基酸序列 8
图 10 葡萄品种‘巨峰’不同组织和不同生长发育阶段中Rs基因相对表达量的比较 9
图 11 葡萄果皮愈伤组织的诱导与培养 10
图 12 作为受体材料的愈伤组织 10
葡萄Rs基因的克隆、序列分析及时空表达特征鉴定
白藜芦醇（Resveratrol 简称Res）又称白藜三醇，化学名称为3，4’，5–三羟基–1，2–二苯乙烯（3，4’，5-trihydroxystilbene）[1]，分子式C14H12O3，相对分子质量228 25，是植物体内天然二苯乙烯类多酚物质，在植物代谢中为次生代谢产物[2]。它是植物体在恶劣环境下或遇到病原害时自身分泌的一种抗毒素[3]。另外，它还具有许多医疗保健作用，如抗氧化、抗肿瘤、抗血小板凝聚、抗细菌和真菌、防止人体低密度脂蛋白（LDP）氧化等。因此，Res 已成为科学家们高度重视的天然活性成分[4]。目前，很多国家和地区都开发生产了Res及其制品并应用于食品、医疗保健品和化妆品等领域。比如，日本将Res作为食品添加剂，美国将Res纳入膳食补充剂，我国也将Res制成了天然保健食品[5-7]。
目前至少已经在21 个科、31 个属的72 种植物中发现了Res，如：葡萄属、蛇葡萄属，豆科的落花生属、槐属、决明属，姚金娘科的桉属，百合科的藜属，蓼科的蓼属等。存在Res的许多植物是常见的药用植物，如藜芦、决明、虎杖等，有的甚至就是食物，如葡萄和花生[8]。在现有报道中，葡萄中含量最高，但在葡萄不同部位中Res含量不同，而葡萄皮是Res的主要合成部位。尽管葡萄中Res的含量相对较高，但是作为一种次生代谢物质，自然条件下在植物体内的含量相对较低，所以仅仅以目前大面积栽培的天然葡萄果实为Res 的来源远远满足不了人们的需求，欲实现葡萄中Res的高效富集，很有必要认识葡萄中Res代谢的调控机制。而Res的合成受到 PAL、4CL、C4H、STS(二苯乙烯合酶)、PMT (赤松素-甲氧基转移酶)甚至CHS等多个酶促反应的调节控制，其中最关键的调节酶是RS。RS又被称为3，4’，5–三羟基二苯乙烯合酶，为酮二聚物，是STS中的一类[9]。因此，研究葡萄Rs基因在白藜芦醇代谢过程中的调控作用显得尤为重要，而‘巨峰’在目前生产中作为被广泛栽培的大众品种，相关研究又未见报道，故对‘巨峰’葡萄开展了初步研究，为Rs基因在白藜芦醇代谢过程中的调控作用提供重要的理论依据。