Groucho基因的克隆表达及对保幼激素和蜕皮激素的响应(2)
2.1 马铃薯甲虫Groucho基因的克隆 8
2.2 构建进化树进行进化分析，在分子水平研究物种之间的进化关系 8
2.3 Groucho基因多重序列比对 9
2.4 Groucho最适Q-PCR引物的确定 10
2.5 探究Groucho在马铃薯甲虫不同生长阶段的表达情况 11
2.6 探究Groucho对保幼激素和蜕皮激素的表达响应 12
3 讨论 12
致谢 13
参考文献 13
Groucho基因的克隆、表达及对保幼激素和蜕皮激素的表达响应
引言：马铃薯已经是全世界第四大粮食作物，仅次于小麦、水稻和玉米。在2014年，中国马铃薯种植面积达5570公顷，鲜薯产量达到9500多万吨，面积和产量均占世界的1/4左右，中国已经成为马铃薯生产第一大国。
马铃薯甲虫，又被称为蔬菜花斑虫，英文名称为Colorado Potato Beetle(CPB)，拉丁学名为Leptinotarsa decemlineata，分类上属于鞘翅目（Coleoptera）叶甲科（Chrysomelidae），寄主植物主要是茄科作物，嗜好的寄主有马铃薯叶片、西红柿、茄子和优尔椒等，常将马铃薯整株叶片食光，造成严重危害和产量损失。经过调查发现，马铃薯甲虫的幼虫和成虫常将马铃薯叶片吃成缺刻状或仅留叶脉(Alyokhin et al., 2008；林翠, 2014)，其已经成为马铃薯上最重要的害虫。
马铃薯甲虫作为一种世界性的检疫对象和重大外来入侵物种，在我国，目前主要分布在新疆文吾尔自治区，但其向东传播速度迅速，疫情的发生面积也不断扩大，如果对马铃薯甲虫不加以有效的防治，势必会给我们马铃薯主粮化战略和粮食保障造成巨大损失。
目前，马铃薯甲虫的防治主要依靠杀虫剂(Jiang et al., 2011)，这难以避免地导致其在马铃薯种植产区对多种药剂产生抗药性(Jiang et al., 2011; Jiang et al., 2012)，因此，亟需开发新的作用方式的杀虫剂。
在昆虫幼虫至蛹期，保幼激素阻止由蜕皮激素引起的变态，从而使幼虫蜕皮后仍然文持幼虫形态。在幼虫最后一次蜕皮前，保幼激素滴度降低或缺失，导致全变态昆虫化蛹和不全变态昆虫羽化为成虫(Riddiford et al.,1994)。成虫羽化后，保幼激素又能直接作用于昆虫的生殖过程(Wyatt and Davey et al.,1996)。周期性脉冲的蜕皮激素可以诱导昆虫蜕皮，但蜕皮的性质取决于保幼激素，保幼激素的存在保证蜕皮形成下一龄幼虫。在末龄幼虫中，由于合成停止以及保幼激素代谢在幼虫中以达到临界点，所以导致保幼激素的消失，进而引起蜕皮激素的释放，诱导变态(Smith et al., 2012)。马铃薯甲虫的发育、变态、繁殖等受保幼激素（JH）和蜕皮激素（20E）的调控，但是保幼激素和蜕皮激素的调控机理有待进一步研究。Groucho是WD重复Groucho/TLE家族基因，是一个普遍的发育抑制因子，可以与DNA结合蛋白识别，调节靶标基因转录。之前有研究表明Groucho可能参与到保幼激素和蜕皮激素的信号通路中（Tusar T.Sahaa et al.,2016）。本论文涉及的实验主要研究Groucho在马铃薯甲虫的保幼激素和蜕皮激素通路中的作用，实验者通过克隆得到Groucho全长序列并进行进化分析，确定该基因的时空表达模式，最后用检测Groucho对保幼激素和蜕皮激素信号的表达响应。
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