水稻黄叶突变体的生理分析与基因定位(3)
（8）加40-100µlTE缓冲液或灭菌的双蒸水溶解DNA。
（9） 测DNA浓度。
1．3．2 分子定位与基因定位
选择均匀分布于12条染色体上的135对SSR和Indel标记，在yl1/窄叶青8号F2群体中选出10株黄叶个体，与两个亲本一同进行PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，找出与黄叶表型基因连锁的标记，通过标记的筛选可将目标基因定位于某条染色体上，再用该连锁标记及其附近的标记对F2中的黄叶个体进行连锁验证，从而将目标基因确定在比较具体的某一区间上。
1．3．2．1 PCR反应
（1）PCR反应体系（25µl）
cDNA（10ng/µl） 2.0µl
Primer （2pmol/µl） 1.0µl
10×Bufferfree （MgCl2）
dNTP（2.5mM）MgCl2 （25mM）
11µl
Taq （5u/µl） 0.25µl
ddH2O 11µl
总体积 25µl
（2）PCR反应程序
PCR反应参考Chen等的方法[7] ，略作改动。
step1 95℃ 5min
step2 95℃ 30sec
step3 55℃ 30sec
step4 72℃ 30sec
step5 go to step2 34cycles
step6 72℃ 5min
step7 10℃ 保存
1．3．2．2 PCR产物的检测
（1） 聚丙烯酰胺凝胶电泳