蚕蛹活性多肽及氨基酸的制备工艺研究(5)
1.6 本课题研究的主要内容
本文以蚕蛹粉为主要原料，对蚕蛹蛋白的制备、水解等方面进行研究，并寻求合理的生产工艺，主要包括以下内容：
（1）用胰蛋白酶水解脱脂蚕蛹蛋白和未脱脂蚕蛹蛋白，观察油脂的存在对蛋白质的水解影响。
（2）蚕蛹粉相关参数的测定：蛋白质的含量；脂肪的含量；水分的含量。
（3）采用3种蛋白酶对蚕蛹蛋白进行酶解,确定蚕蛹蛋白水解最优的酶。
（4）选择蚕蛹蛋白水解最优的酶，研究酶解条件对酶解效果的影响，并正交试验，蚕蛹蛋白肽最佳酶解工艺条件的确定。
（5）探讨鲜蚕蛹浆的酶解情况。
2 实验材料和方法
2.1 实验试剂及仪器
本实验对脱脂蚕蛹水解液进行分析使用的主要药品试剂及仪器分别见表2-1和表2-2。
表2-1 实验试剂及材料一览表
名称 规格 生产厂家
甲醛 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
氢氧化钠 分析纯 上海凌峰化学试剂有限公司
柠檬酸 分析纯 上海波尔化学试剂有限公司
磷酸氢二钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
三氯乙酸 分析纯 上海凌峰化学试剂有限公司
碳酸钠 分析纯 国药集团化学试剂有限公司
胃蛋白酶 分析纯 上海凌峰化学试剂有限公司
木瓜蛋白酶 分析纯 上海莱博生物科技有限公司
胰蛋白酶 分析纯 上海莱博生物科技有限公司
Sephadex G-25凝胶 如吉生物科技有限公司
干蚕蛹粉 市售
鲜蚕蛹浆 市售
表2-2实验试剂及材料一览表
名称 生产厂家
凯氏定氮仪 赛因科学仪器有限公司
721可见光光度计 上海菁华科技仪器有限公司
离心机 上海精密科学仪器有限公司
精密电子天平 上海天平仪器厂
旋转蒸发仪 上海贝凯生物工程设备公司
pH计 上海精密科学仪器有限公司
数显恒温水浴锅 国华电器有限公司
磁力搅拌器 巩义市予华仪器有限责任公司
碱式滴定管 上海实验仪器厂
层析柱1.0*20cm 上海青浦沪西仪器厂
紫外检测仪 上海青浦沪西仪器厂
自动部分收集器 上海青浦沪西仪器厂
恒流泵 上海青浦沪西仪器厂
2.2 实验方法
2.2.1 研究油脂对蚕蛹蛋白水解度的影响
本研究对蚕蛹蛋白进行酶解研究，蚕蛹中除了含有优质的蛋白质外还含有丰富的油脂，这油脂的存在可能影响蛋白质在水溶液中的溶解、水解，对蚕蛹蛋白的水解过程产生影响。通过对比实验进行研究。
2.2.2 蛋白酶最优反应条件的确定
在单因素试验结果的基础上，对胰蛋白酶进行正交试验，确定出各自的最优反应条件（反应温度、固液比、反应时间和酶的添加量）。每组试验都是四因素三水平，采用L9(34)正交表。正交试验设计(Orthogonal Test Design)是研究多因素多水平的一种试验设计方法，它是根据正交性，从全面试验中挑选出部分有代表性的点来进行试验，这些有代表性的点具备“均匀分散，齐整可比”的特点，正交试验设计是分式析因设计的主要方法。它是一种经济、快速、高效率的实验设计方法。