1.1.3植物组织培养的主要途径【9】

植物组织培养的主要途径有以下五种：

（1）胚胎培养    

是指把胚（包括成熟的或者没有成熟的）从胚珠当中提取出来作为组培的外植体。

（2）器官培养    

指的是选取的外植体为根茎等植物器官，例如根尖，茎节和切段植物茎的茎尖、植物的叶原基，以叶柄、叶鞘、子叶和叶片，在无菌条件下，离体培养一些花器列如花瓣、雄蕊花药、果实等。往往在形成小芽的同时或之前也形成少量的愈伤组织【10】。

（3）组织培养    

这里主要是指狭义上的组织培养，指的是从完整地植物体中分离出一些例如：分生组织、韧皮部、木质部、皮层、表皮、薄壁组织、胚乳组织等各个部位的组织作为组织培养的外植体，也可以选取已经被诱导形成愈伤组织的组织作为外植体来进行培养。

（4）细胞培养    

这种方法是指，从植物的组织或器官中，提取出单个的细胞，例如用特定的方法采集花药、卵细胞等来作为外植体来进行体外的无菌培养。

（5）原生质体培养    

此法是指去掉植物细胞的细胞壁留下原生质体，用原生质体作外植体在体外无菌培养。

1.1.4植物组织培养的一般步骤【11】

植物组织培养的步骤简单概括为：选择适当的外植体——剪接植物器官或组织——经过脱分化（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过再分化形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。过程大致为：

（1）培养材料的采集    

组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花等材料，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。对于木本花卉来说，可以采集生阔叶树一两年生枝条上的部分。我们一般采集针叶树的种子，提取其内部的胚轴或者是子叶。对于草本植物，茎尖常常是被采集的对象。 在快速繁殖的实验中，我们常常选取茎尖作为植物组织培养的外植体，通常将它们切为0.5厘米左右，如果想要培养并获得无病毒苗，我们常常选取茎尖处的分生组织部分作为培养的材料，长度并且要在0.1毫米以下。

（2）培养材料的消毒

    ①先用洗衣粉将选取的材料洗得干净一点，然后用自来水洗去表面的洗衣粉残液，再用蒸馏水洗净，必要时可用毛笔轻轻刷外植体的表面。

    ②在无菌坏境中，把外植体放置在盛有75%的酒精的无菌烧杯中中浸洗，时间切忌不可过长，一般30秒（视情况而定）左右较为适宜，如果时间过短，则不能消毒干净，时间如果过长，则会杀死外植体，具体消毒时间根据选取的外植体不同而不同【12】。

    ③然后把外植体在无菌环境里转移到盛有0.1%的升汞溶液中浸洗消毒，具体消毒时间根据选取的外植体不同而不同。

    ④取出后用无菌水冲洗多次，直到冲洗干净。 

（3）制备外植体 

在超净工作台上（或无菌环境中）用剪刀、镊子等工具剪去前面消毒过的外植体，嫩枝外皮将被剥掉，剪去芽的鳞片以及种皮和胚乳等，但是不需要将叶片的皮剥去。然后再将其切成0.2厘米－0.5厘米厚的小片，这就做好了外植体。在操作中用手触碰实验材料是绝对不可以的，以防污染。

（4）接种和培养 

    ①接种　在超净工作台上，将已经切好的外植体立即接在培养基上，大约每瓶接种4个左右，最好每瓶接一个。