多种水果中多酚含量的检测及实验比较(7)
2. 材料与方法
2.1 原料与试剂
苹果、梨、香蕉、橙子。
没食子酸标准品：山海国药集团化学试剂有限公司。
2.2 主要仪器与设备
水浴锅；电子天平；752型紫外可见分光光度计；量筒；烧杯。
2.3 方法
2.3.1水果浆汁的制备
将水果洗净、晾干，取可食用部分切碎，组织捣碎机匀浆。取试样适量（均取5g匀浆），用80mL蒸馏水洗入100mL容量瓶中，定容，放在100℃沸水中水浴保温30min，取出，冷却至室温，过滤，滤液备用。
2.3.2 福林(FC)试剂的配制
精密称取100.00g钨酸钠（Na2WO4•2H2O）和25.00g钼酸钠（Na2Mo4•2H2O）于2000mL圆底烧瓶中，加入700mL蒸馏水、85%浓磷酸50mL和浓盐酸100mL，充分混匀，以小火回流10h，再加入150.000g硫酸锂（Li2SO4•H2O）、50mL蒸馏水和几滴溴水。开口继续煮沸15min，使得溴水完全挥发。待溶液冷却并定容到1000mL，过滤并置于棕色瓶中冰箱低温放置可长期使用，使用前稀释1倍。
2.3.3 没食子酸标准品溶剂和波长的确定
精确称取20mg干燥没食子酸标准品2份，分别以蒸馏水和80%丙酮为溶剂，完全溶解后定容至100mL,配制成0.2mg/mL。吸取1mL分别加入FC试剂2mL，20%碳酸钠溶液10mL，定容至25mL，40℃避光反应1.5h。以蒸馏水为空白，分别于730、760、765、770nm处测定吸光度值。
2.3.4 显色条件的确定
（1） 显色温度的确定：
以上述确定的溶剂配制0.2mg/mL的没食子酸标准溶液，取6份，每份1mL，按照上述实验方法，固定其他实验条件（FC试剂2mL，20%碳酸钠溶液10mL，避光反应1.5h），分别在30、40、50、60、70、80℃下反应，测定相对的吸光值，以比较不同反应温度对吸光度的影响；
（2） 显色时间的确定：
同上取没食子酸标准溶液6份，每份1mL，按上述实验方法，固定其他实验条件（FC试剂2ml，20%碳酸钠溶液10ml，40℃，避光），分别反应0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0h测定吸光度值，以比较不同显色时间对吸光度的影响；
（3） FC试剂用量的确定：
同上取没食子酸标准溶液6份，每份1ml，按照1.2.1所述实验方法，固定其他实验条件（20%碳酸钠溶液10ml，于40℃避光反应1.5h），分别加入FC试剂0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml，测定吸光值，以比较FC试剂用量对吸光度的影响；
（4） 20%碳酸钠用量的确定：
同上取没食子酸标准溶液6份，每份1ml，固定其他实验条件（FC试剂2ml，40℃避光反应1.5h），分别加入20%碳酸钠溶液2、4、6、8、10、12ml，测定吸光值，以比较20%碳酸钠溶液用量对吸光度的影响。
2.3.5 标准曲线的建立
准确量取上述标准液0、0.5、1、1.5、2、2.5、3mL于50mL容量瓶中，按2.3.4中测定的结果来加入相应的FC试剂和20%碳酸钠溶液，用蒸馏水定容，按2.3.3中测定的波长下来测定吸光度，以吸光度为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2.3.6 样品的测定
用移液管精确量取制备好的样品溶液0.5mL于50mL容量瓶中，加入30mL蒸馏水，摇匀，按2.3.4中测定的结果加入相应的FC试剂，Na2CO3溶液，用水定容至刻度，混匀，水浴反应，冷却后在2.3.3中测定的波长下测定其吸光度。
2.3.7 重复试验
将四种水果按照上述的步骤重复做两次，并分别记录数据。
3. 结果与分析
3.1 没食子酸标准品溶剂和测定波长的确定
Table 1 Establishment of Solvent for gallic acid and wavelength on absorbency in determination
Wavelength（nm） Absorbency
Distilled water 80%Acetone solution
730 1.036 1.039
760 1.041 1.044
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