供试菌:甘薯黑斑病菌(C.fimbriata) ;编号409的壳寡糖、编号410的壳寡糖、编号911的壳寡糖、编号311的壳寡糖样品(购于肇庆长龙生物科技有限公司)
b. 供试培养基:土豆葡萄糖琼脂培养基(PDA)
c. 主要仪器和试剂
实验仪器:电磁炉、磁力搅拌器、高压灭菌锅、恒温培养箱、血球计数板、显微镜、烘箱等
实验试剂:配置好的不同浓度的壳寡糖溶液、调节pH的1 mol/L的HCl溶液和NaOH溶液、无菌水
1.2 试验方法
1.2.1 通过实验测试编号409的壳寡糖对甘薯黑斑病菌的抑制效果
a. 首先制作编号409的壳寡糖溶液:编号409的壳寡糖取1.5 g、量取100 mL蒸馏水,将壳寡糖、蒸馏水和转子依次加入锥形瓶中,用玻璃棒搅拌均匀至完全溶解。
b. 制作含有壳寡糖的PDA培养基:来!自~优尔论-文|网www.youerw.com
本次实验需要1000 mL 的PDA培养基,需要取200 g新鲜土豆。制作过程如下:将新鲜土豆洗净削皮切成小块,加入1000 mL的蒸馏水加热,直到玻璃棒轻戳土豆即破。取一只1000 mL的大烧杯并加入20 g的葡萄糖,将四层纱布套在杯口并固定好,然后将煮好的土豆液从上至下慢慢倒入到烧杯中过滤,置于磁力搅拌器上搅拌至完全溶解,用蒸馏水定容到所需的容量[14]。接下来制作含壳寡糖的PDA培养基。在四个锥形瓶分别加入90、87、84、78 mL,再在各个锥形瓶中分别加入配制好的编号409的壳寡糖溶液0、3、6、12 mL,最后在4个锥形瓶中分别加入琼脂粉1.35 g,加塞、包扎,置于灭菌锅121℃灭菌30 min。灭菌结束后,在70 ℃烘箱中烘干20 min,即可。
c. 倒平板:在超净工作台中倒平板。超净工作台使用前应先打开紫外灯照射15 min。关闭紫外灯10 min后将所需物品全部放入工作台,并将双手洗净,再用酒精棉擦拭消毒。点燃酒精灯,将培养液倒入平板中,倒平板过程中要严格防止杂菌污染。待平板冷却后准备接种。