本实验通过不同浓度的MT处理徐32,加入营养液培养在10日内取样,测量超氧阴离子、电导率以及MDA相应的含量。分析不同浓度的褪黑素对甘薯耐盐性的强弱。
2 材料与方法
2.1 材料:
2.1.1 实验材料:
徐32薯块,由江苏省徐州市农科院甘薯研究中心提供。
2.1.2 实验幼苗的选取:文献综述
薯块萌发后选取徐32甘薯幼苗,挑选长势较好大小差异不大的的50株植株。
2.1.3 实验试剂:
氯化钠 核黄素 Tris-HCl buffer 硫代巴比妥酸(TBA)三氯乙酸 TCA 磷酸缓冲液 盐酸羟氨 对氨基苯磺酸 1-萘胺
2.2 方法:
2.2.1 甘薯幼苗的培养:
挑选出生长情况良好,生长状态相似的土培植物,徐32,四分之一霍格兰培养液培养十天
2.2.2 不同浓度MT处理
配制褪黑素的浓度为(100μM、10μM、5μM、1μM、0.5μM、0.1μM),预处理甘薯幼苗三天,再加盐处理,分别标记为nMT+NaCl处理组,过一个星期后对三个常规伤害指标(MDA)丙二醛、超氧阴离子、电导率进行测量。
2.2.3 酶活性的测定:
2.2.3.1 酶液的提取:
(1)配制提取液浓度为50 毫摩尔每升的Tris-HCl buffer 并且调节PH等于7.0。
(2)取不同浓度下MT处理过的叶片各0.3g,根为0.2 g,加入液氮研磨,用EP管收集研磨物,提取时加入3 毫升提取液,放到冰谷中,提前将冷冻离心机预冷温度为4摄氏度,用1 0000转每分钟离心一刻钟,再用枪吸取上清液,在冰中保存。用于测定MDA的活性。来!自~优尔论-文|网www.youerw.com
2.2.3.2 丙二醛(MAD)的测定:
(1)称量5克硫代巴比妥酸,用三氯乙酸定容到1升。
(2)取叶片并称重,放在小研钵里加入氮气研磨,将碎末装入管中,加入TCA 3毫升 用4000转每分钟下离心十分钟。离完心EP管中的上清液即为样品提取液。接下来吸取2毫升提取液,向其中加入2毫升浓度为百分之0.6的TBA混匀,并且在试管上加盖,煮沸15分钟,冷却离心。吸取上清测定在波长为600nm、532nm和450nm下的OD值[6]。