β-1,4-内切葡聚糖酶可特异性作用于β-1,4-葡萄糖苷键，使其内部的β-l,4-糖苷键水解，生成纤维二糖与纤维寡糖等短链低聚糖；β-l,4-糖苷键把这些短链低聚糖继续降解为两个葡萄糖分子[13]。

秸秆多种多样，包括稻草、麦秸、玉米秸、大豆秸等，其主要成分是木质素、纤维素、半纤维素等聚合而成的致密碳水化合物以及少量蛋白质、脂肪、木质素、醇类、醛、酮和有机酸[14]。不同秸秆其组成成分和比例也不同，其主要成分是纤维素，其次是半纤维素和木质素，不同植物体残体中这3种物质的比例是不同的。

1.2.2  纤维素酶的性质

细菌产生的纤维素酶量少，主要是内切酶，大多数对结晶纤维素没有活性，而且不能分泌到细菌细胞外，常常聚集形成多酶复合体。真菌能产生大量的纤维素酶，产生的酶组分全能分泌到菌体外，一般不聚集成多酶复合体，但可以相互发生强烈的协同作用[14]。

2  材料与方法

2.1  材料

2.1.1  菌株

所用菌种为实验室保藏的内切葡聚糖酶重组马克斯克鲁维酵母

2.1.2 主要仪器及设备

2S-75HJ型高压灭菌锅：江阴滨江医疗设备有限公司

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台：苏州净化设备有限公司

SPX-250B生化培养箱：上海佳胜实验设备有限公司

HD-930型组合式全温摇床：太仓市博莱特实验仪器厂，

电子天平BS210S：北京赛多利斯天平有限公司

高速冷冻离心机HR21M：湖南赫西仪器设备有限公司

HD-930DHG-9240A型电热恒温鼓风干燥箱：上海精宏实验设备有限公司

EPED-E2-10TF纯水仪：南京易普易达科技有限公司

雷磁pHS数显pH计:上海精密科学仪器有限公司

HH-S恒温水浴锅：金坛市亿通电子有限公司

722S型可见分光光度计：上海精密科学仪器有限公司

2.2  主要试剂以及培养基的配制

2.2.1主要试剂

1．0.1M 磷酸缓冲液（PBS）（PH=6.0）：1L蒸馏水中加入13.682g 二水磷酸二氢纳和4.405g十二水磷酸氢二钠充分溶解。

2．乙酰胺：将装有乙酰胺的瓶子在121℃下高温灭菌20min,在100mL的0.1M磷酸缓冲液（pH=6.0）中加入1.475g乙酰胺，在超净工作台上点燃酒精灯，用针管吸取配好的溶液装上200微升的过滤芯，将溶液过滤到灭菌后的瓶子中，冻存备用。来`自^优尔论*文-网www.youerw.com

3．DNS：蒸馏水1416mL、氢氧化钠19.8g、3,5-二硝基水杨酸10.6g混合，溶解后加入酒石酸钾钠306g、苯酚（50℃溶化）7.6mL、偏重亚硫酸钠8.3g，用5-6mL，0.1M的HCl对3mL配好的溶液进行滴定，用苯酚作指示剂，溶液从红色变成原有的颜色。如果有必要时还需要加入氢氧化钠，配好的DNS分装后需避光。

4．柠檬酸缓冲液（50mM，pH4.0）：A溶液：1.0505g柠檬酸溶于50mLddH2O。B溶液：1.4705g柠檬酸钠溶于50mLddH2O。从A溶液中取32.75mL，B溶液中取17.25mL，两者混匀，再加入50mLddH2O。

5．2% CMC（ w/v）（羧甲基纤维素纳）溶液：称量2g CMC-Na（800mPa-s~1200mPa-s）,加入约80mL柠檬酸缓冲溶液（50mM，pH4.0），50℃边水浴边搅拌溶解，完全溶解后定容至100mL，储存于冰箱中备用。