1 材料与方法 文献综述

1.1 土壤样本来源

土壤取自新沂农药厂附近长期受均三嗪除草剂的污染的农田土壤。

1.2 农药及试剂

均三嗪农药由南京伟沃生物科技有限公司提供。其他试剂还有PCR扩增试剂盒；草酸铵结晶紫染液；碘液；95%乙醇；番红染液；EB染液；香柏油等。

1.3 培养基

无机盐培养基：MgSO4.7H2O 0.2 g, NaCl 0.5 g,K2HPO4 1.5 g,KH2PO4 0.5 g,然后加蒸馏水调至1 L; LB固体培养基：NaCl 10 g,胰蛋白胨10 g,酵母粉5 g,琼脂粉20-22 g, pH 7.2-7.5。上述两个培养基均在121 ℃灭菌20分钟，备用。

1.4 降解菌的驯化，富集培养和筛选

1.4.1土壤的富集培养

取土壤10 g加入250 mL的锥形瓶中，然后加入100 mL的无菌水，摇床培养（35 ℃，180 r/min）4 d，以后每次按10%的接种量继续进行稀释，摇床，每次4 d共6次。

1.4.2降解菌株的驯化、分离

取最后一次土壤富集培养液体的10%加入到含有均三嗪农药（0.01 mg/L）的无菌水100 mL 的锥形瓶中，继续摇床培养，35℃，180r/min培养一周，然后取其中10 % 的富集培养液加入到含有均三嗪农药0.05 mg/L的无菌水100 mL的锥形瓶中，摇床培养，再转接到含有均三嗪农药0.1 mg/L的锥形瓶中继续培养一周。把最后一次的富集培养液通过浓度梯度稀释法稀释到10-3，然后用L型涂布棒涂布到LB固体培养基平板上，（不加均三嗪农药的LB固体培养基平板作对照）置于30℃恒温培养箱中培养48h，再在含均三嗪农药的固体培养基上挑取菌落生长较好的菌株（不含均三嗪农药的培养基不生长菌落），于新的培养基平板上划线纯化，LB纯化后冷藏备用。来.自>优:尔论`文/网www.youerw.com

1.5 降解菌的形态与生理生化鉴定

1.5.1  降解菌的形态鉴定

常用革兰氏染色法一般包括初染，媒染，脱色，复染四个步骤。在LB固体培养基上进行菌株W1的划线，培养24小时待其长出单菌落后，取单菌落进行革兰氏染色，然后在油镜（100X）下观察W1菌株的革兰氏染色反应与细菌的形态。再在电镜下观察细菌的结构。

1.5.2  降解菌的生理生化特性过程

用枪头挑取单菌落制成菌悬液，先在1至8号无机盐培养基中分别加入甘露醇，纤维二糖，乳糖，葡萄糖，蔗糖，果糖，山梨醇，和维生素B1共8种碳源，然后将配制好的菌悬液加入到这8个培养基中，35 ℃，180 r/min摇床培养24 h, 观察各碳源的利用率。