摘要输血是医学中一种重要的救治手段，对医疗卫生事业的发展起到了很大的作用。由于血荒现象严重，有必要加大对血红蛋白氧载体作为血代品的研究和开发。传统的化学方法修饰的血红蛋白氧载体，有很好的携氧供养能力，但仍有很高的副作用，对于实际应用还是一个很大的阻碍。72219

本项目的最终目的是构建由白蛋白-血红蛋白α亚基融合蛋白与β亚基组成的大的血红蛋白分子。 所表达的大分子量的血红蛋白以及引入的突变位点可以改善血红蛋白对O2和NO的结合，降低血红蛋白氧载体的副作用。本毕业课题的内容是: 利用重叠延伸PCR的技术，在人血红蛋白的Beta亚基中引入一个点突变并与pETDuet1载体连接，构建其原核表达载体。

毕业论文关键词：血红蛋白  重叠延伸PCR  载体构建

Design and construction of prokaryotic expression vector of hemoglobin-based oxygen carrier

Abstract

 Blood transfusion is one of the important means of medical treatment, which plays a very important role in the development of medical and health services。 Because the blood shortage phenomenon is serious, it is necessary to increase the research and development of hemoglobin as a blood substitute。 Traditional chemical methods modified hemoglobin oxygen carrier, has a good oxygen carrying capacity, but there are still a lot of side effects, for the practical application is still a big obstacle。

The ultimate goal of this project is to construct a large hemoglobin molecule composed of albumin hemoglobin subunit fusion protein and beta subunit。 The expression of the large molecular weight of hemoglobin and the introduction of the mutation site can improve the hemoglobin on the combination of O2 and NO, reduce the side effects of hemoglobin oxygen carrier。 The content of this graduation project is: using the technology of overlapping extension PCR, we introduce a point mutation in the Beta subunit of human hemoglobin and connect with pETDuet1 vector to construct its prokaryotic expression vector。

Key words: hemoglobin  overlap PCR  Vector construction

目 录

摘  要 I

Abstract II

目 录 III

1 绪论 1

1。1 引言 1

1。2 血代品 1

1。3血红蛋白及其氧载体 1

1。4本课题设计方案 2

2 实验设备、耗材和试验方法 2

2。1实验设备和试剂 2

2。2 培养基和溶液的配制 3

2。2。1 LB（Luria-Bertani）培养基的配制 3

2。2。2 溶液的配制 3

2。2。2。1 抽提/裂解缓冲液和溶液 3

2。2。2。2 电泳和凝胶加样缓冲液 4

2。2。3  DNA琼脂糖凝胶的制备 5

2。2。3。1 1%琼脂糖凝胶 5

2。3试验方法 5

2。3。1 DNA限制性核酸内切酶反应 5

2。3。2 质粒的微量提取与验证                            6

2。3。3 感受态细胞的制备和质粒转化