摘要： 低聚果糖（FOS）具有选择性地促进肠道植物乳杆菌生长的作用，从而能够显著改善肠道菌群的平衡。SacR2作为局部代谢调控因子，对植物乳杆菌代谢低聚果糖起调控作用。为研究其调控机理，本实验以植物乳杆菌的基因组作为模板，PCR扩增出目的片段SacR2基因，基因长度为981bp，共编码326个氨基酸。采用PCR融合技术将扩增出的目的片段与大肠杆菌表达载体pTolo-EX5连接，构建大肠杆菌异源表达载体pTolo-EX5-SacR2并诱导重组蛋白的表达，蛋白大小与预期大小一致。优化目的蛋白表达条件，并去纯化目的蛋白。74637

毕业论文关键词：调控因子；植物乳杆菌；低聚果糖；重组蛋白

Soluble Expression and Purification of Local Regulatory Factor SacR2 of Lactobacillus plantarum ST - Ⅲ

Abstrcat: Fructooligosaccharides (FOS) has the effect of selectively promoting the growth of intestinal plant Lactobacillus, which can significantly improve the balance of intestinal flora。 SacR2 acts as a local metabolic regulator, and regulates the metabolism of Lactobacillus plantarum。 In order to study its regulatory mechanism, the gene fragment SacR2 gene was amplified by PCR from the genome of Lactobacillus plantarum as a template。 The length of the gene was 981bp, encoding 326 amino acids。 The recombinant plasmid pTolo-EX5-SacR2 was constructed and ligated with Escherichia coli expression vector pTolo-EX5 by PCR fusion technique。 The protein size was 38kDa, which was consistent with the expected size。 Optimize the expression conditions of the target protein, and purify the target protein

Keyword：Lactobacillus plantarum; Fructooligosaccharides; Recombinant protein

目录

1。绪论 1

1。1植物乳杆菌概述 1

1。2低聚果糖概述 1

1。3乳酸菌代谢低聚果糖调控的研究进展 1

1。4代谢调控因子的预测 2

1。5大肠杆菌作为表达宿主的优点 3

1。6提高可溶性蛋白表达量的方法 4

1。7本课题的研究意义 5

2。材料与方法 7

2。1菌种、培养基与试剂以及配置方法 7

2。1。1菌种 7

2。1。2引物 7

2。1。3培养基及样品 7

2。1。4试剂配置方法 7

2。2仪器与设备 8

2。3实验流程 9

2。4实验方法 9

2。4。1植物乳杆菌基因组的提取 9

2。4。2引物设计及目的基因的扩增 10

2。4。3大肠杆菌重组表达质粒的构建 12

2。4。4目的蛋白的诱导表达 13

2。4。5重组蛋白的可溶性诱导表达条件的优化 14

2。4。6重组蛋白的纯化 14

3。结果与分析 16

3。1抽提细菌基因组DNA的抽提和电泳 16

3。2目的基因的扩增 16

3。3大肠杆菌重组表达质粒的构建 16