细菌的生物被膜是指菌体依附在固体载体的表面，菌体在生长过程中会分泌一些胞外多糖或蛋白质，它们互相粘连，就形成了膜状物，将其菌体及其它的后代全部包裹在内[8]，而且生物被膜在连续污水处理中也得到广泛运用。在生物膜反应器中，产生物絮凝剂的菌株形成生物被膜固定在载体上，提高二沉池中活性污泥的回收效率，从而提高污水处理效率。但是，由于复杂的水体环境，像是造纸废水，发电厂废水等含有有毒物质，会造成生物被膜的解聚。因此，构建产生物絮凝剂的同时又可以形成生物被膜的高效菌株，能提高污水处理效率，降低成本[9]。 

使用现代分子生物学手段构建基因工程菌已成为一种改造菌种常用的方法。环二鸟苷是细菌中普遍存在的第二信使[10-14]，它参与了细菌的许多生理活动，包括生物被膜的形成，细菌分化，形态变化等[15]。c-di-GMP介导的细菌信号传递具有普遍性[16-17] 。环二鸟苷在细菌胞内的代谢受含GGDEF结构域的二鸟苷环化酶和含EAL结构域的磷酸二酯酶催化[18]。而它的作用机制则与两类受体有关，一是效应蛋白，二是核糖开关[15]。对于c-di-GMP确切的调控机制目前还不清楚，有待进一步的研究。文献综述

本课题组前期分离得到一株絮凝剂产生菌，编号为L20。在此基础上，本研究通过结合转移的方法在菌株L20内部表达c-di-GMP合成酶，提高菌株内部c-di-GMP的含量，并相应提高菌株形成生物被膜的能力。最终为利用生物膜法实现絮凝剂产生菌的固定化及促进其在污水处理中的应用提供一定的理论基础。

2材料与方法

2。1 实验材料与试剂

2。1。1  实验菌株

L20：絮凝剂产生菌；

L6：大肠杆菌，含有pYedQ2质粒，可以表达相应c-di-GMP合成酶，提高菌主内部第二信使c-di-GMP的含量；WM3064：大肠杆菌营养缺陷型，需在添加2，6-二氨基庚二酸 (DAP) 的培养基中才能生长。

2。1。2  实验仪器及药品

表2-1 仪器目录

Table 2-1。 Name of Instruments

仪器名称 型号 厂家

超净工作台 SW-CJ-1F 苏州安泰净化厂

恒温培养箱 DNP-9052 上海精宏实验设备有限公司

全温摇瓶柜 HY  G-A 太仓市实验设备厂

酶标仪 Synergy2 美国伯腾仪器有限公司

续表 2-1

仪器名称 型号 厂家

冰柜 HFU 586 Basic 日本Therom仪器有限公司

高速冷冻离心机 Centrifuge 5430R 艾本德仪器有限公司

高压灭菌锅 MLS 3780 日本三洋公司

电子天平 MP4002 上海恒平科学仪器有限公司

电子分析天平 BSA224S 赛多利斯仪器有限公司

凝胶成像仪 GelDoc XR 美国伯乐仪器有限公司

表2-2 药品目录

Table 2-2。 List of experimental reagents