药品名称 纯度等级 生产厂家

NaCl 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

胰蛋白胨 分析纯 OXOID试剂有限公司

酵母浸粉 分析纯 OXOID试剂有限公司

琼脂粉 分析纯 BIOSHAPR试剂有限公司

MgSO4。7H2O 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

K2HPO4 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

葡萄糖 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

可溶性淀粉 分析纯 国药集团化学试剂有限公司

水解酪蛋白 分析纯 上海蓝季科技发展有限公司

高岭土 分析纯 西陇化工服份有限公司

2,6—二氨基庚二酸 分析纯 Sigma试剂有限公司

庆大抗生素 分析纯 Sigma试剂有限公司

氯霉素 分析纯 Sigma试剂有限公司

质粒提取试剂盒是TIANGEN试剂有限公司的质粒小提试剂盒(TIANprep Mini Plasmid Kit)；琼脂糖凝胶电泳使用的琼脂粉为BIOWEST试剂有限公司的Regular Agarose G-10，Marker是TaKaRa试剂有限公司的DL10000 DNA Marker，条带分别为10000,7000,4000,2000,1000,500,250。 

2。1。3  培养基的配置

LB液体培养基：酵母粉 5 g/L, NaCl 10 g/L, 胰蛋白胨 10 g/L

LB固体培养基： 酵母粉 5 g/L, NaCl 10 g/L, 胰蛋白胨 10 g/L ，琼脂粉 20 g/L

R2A液体培养基：葡萄糖 0。5 g/L，水解酪蛋白 0。5 g/L，可溶性淀粉0。5 g,酵母粉 0。5 g/L，胰蛋白胨 0。5 g/L，MgSO4。H2O 0。05 g/L , K2HPO4 0。3 g/L

L20发酵培养基：麦芽糖 4 g/L，酵母粉6 g/L，MgSO4。H2O 0。2 g/L , K2HPO4 0。6 g/L

2。1。4  DAP及抗生素母液的配制

DAP：准确称取0。1 g 2,6-二氨基庚二酸 (DAP) 溶于10 ml 去离子水中，配置成浓度为10 mg/mL的母液，使用0。22 μm滤头对母液进行过滤灭菌。-20 ℃保存，供长期使用。

GM：准确称取0。3 g庆大抗生素（Gm）溶于10 ml去离子水中，配置成浓度为30 mg/mL的母液，使用0。22 μm滤头对母液进行过滤灭菌。-20℃保存，供长期使用。

CM：准确称取0。3 g氯霉素抗生素（Cm）溶于10 ml去离子水中，配置成浓度为30 mg/mL的母液，使用0。22 μm滤头对母液进行过滤灭菌。-20 ℃保存，供长期使用。

2。2 实验方法来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

2。2。1 培养基灭菌

将按照1。1。3配置好的LB和R2A培养基放入高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌条件为121 ℃，20 min或者115 ℃，30 min均可。

2。2。2 菌株培养

L20培养条件：使用R2A液体培养基,恒温振荡培养，温度37 ℃，转速设为180 rpm。

L6 培养条件：使用LB液体培养基，恒温振荡培养，温度37 ℃，转速设为180 rpm。