主要试剂:胶回收试剂盒购自OMEGA 公司;PrimeScript®RT试剂盒购自日本TaKaRa公司;RNA 抽提Trizol购自美国 Invitrogen 公司;DNA ladder 2000、PCR引物由上海英骏公司完成;葡萄糖分析试剂盒、牛血清蛋白(BSA)、淀粉转葡萄糖苷酶、蒽酮(分析纯)、海藻糖均购自Sigma 公司;BCA 蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天公司;HiFi taq DNA聚合酶购自北京全式金生物技术有限公司;引物送至上海Invitrogen 公司合成;荧光定量染料为Bio-Rad公司专用试剂。

主要仪器:CFX96 型PCR仪,美国BIO-RAD公司;NanoDrop™ 2000型微量测定分光光度计,美国Thermo Scientific 公司;YC-D209型光照培养箱,中国亚都公司。

1。2  实验方法 

1。2。1 褐飞虱海藻糖、葡萄糖和糖原含量的测定

 分别取30头取食TN-1、中浙优1号、IR56水稻7 d的褐飞虱,冰浴PBS研磨;然后4℃、1000×g离心20 min;上清用于海藻糖含量的测定。将取食TN-1、中浙优1号、IR56水稻7 d的褐飞虱的上清液分成3组,每组做3个以上重复,相同处理的取食TN-1水稻的褐飞虱上清液作为对照,采用郭永霞(2002)的方法提取海藻糖。将40 mmol/L的海藻糖溶液用PBS稀释为1。6、0。8、0。6、0。4、0。2、0。1、0。05 mmol/L的标准液,制作标准曲线;取10 μL标准液或海藻糖提取液,加入 10 μL 1%H2SO4,90℃水浴10 min,冰水浴3 min;再加入10 μL 30%KOH,90℃水浴10 min,冰水浴3 min;然后加入200 μL显影剂(0。02 g蒽酮加10 mL 80% H2SO4),90℃水浴 10 min,冰浴冷却,测A630;最后计算褐飞虱海藻糖的含量。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

葡萄糖含量的测定:取50 μL上述1000×g离心上清液,加入100 μL葡萄糖分析试剂,37℃水浴30 min;加入12 mol/LH2SO4终止反应,测A540;标准曲线制作同上;最后进行褐飞虱体内葡萄糖含量的计算。

糖原含量的测定:取100 μL上述1000×g离心上清液,加入淀粉转葡萄糖苷酶20 μL 0。1U/μL,40℃水浴4 h;以相同处理不加淀粉转葡萄糖苷酶作为标准对照;取待测样品50 μL,加入100 μL葡萄糖分析试剂,37℃水浴30 min;加入100 μL12 mol/L的H2SO4终止反应,测A540;标准曲线的制作同1。2。1;最后计算褐飞虱体内糖原的含量。

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