赤藓醇在自然界中含量极低，因此通过从生物体提取赤藓醇的方法获得赤藓醇是不现实的，而化学法和微生物发酵法被认为是赤藓醇大规模生产的主要途径。然而，赤藓醇化学合成需在镍催化剂的存在下，双醛淀粉在高温中化学反应后获得的，该途径效率较低，很难实现其工业化[5]。在过去的很长一段时间内，赤藓醇的商业化生产一直依赖于短梗霉属（Aureobasidium sp。）及链霉属（Pseudozyma tsukubaensis）以葡萄糖为原料发酵合成[6]。如今，一些能够容忍高渗透压的赤藓醇发酵菌株被相继报道，如木兰假丝酵母（Candida magnoliae）[7]，三角酵母（Trigonopsis variabilis）[8]，丛梗孢属（Moniliella sp。）[9]，解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）[10,11]。最近，高产赤藓醇的Y。 lipolytica获得了越来越多的关注[10，11，12]，与其他赤藓醇发酵工艺相比，Y。 lipolytica发酵工艺具有很多的优点，如更广泛的原料范围及对人类健康无害[13]。事实上，作为一个传统的细胞工厂，Y。 lipolytica已用于多种产品的制造，如利用不同的技术手段生产蛋白质、脂肪及有机酸[14,15,16]。在之前的研究中，Y。 lipolytica可在特定的培养系统中将纯甘油或粗甘油转化为赤藓醇。目前，许多研究通过发酵条件优化或菌种突变来提高赤藓醇发酵产量及生产力[11,17]。

在生物技术研究和生物产业中，微生物诱变育种已广泛用于有效地改变目标菌株的基因组。传统上，细胞通常暴露于物理、化学或生物诱变剂，而后进行筛选，最终获得理想表型。最近，常压室温等离子体诱变系统（ARTP），一种新型诱变育种方法，被新开发出来。该方法有许多优势，包括低射流温度，产生均匀的等离子体，快速的突变，高度多样化的突变体，成本低及操作简单安全等[18]，因此，ARTP已成功用于微藻、真菌和细菌等40多种的微生物突变的诱变育种[20-22]。

我们在前期实验中，从海洋环境中分离出一株Y。 lipolytica SWJ-1b，该菌株是发酵产柠檬酸的优良菌株[23-25]。当Y。 lipolytica SWJ-1b在柠檬酸发酵培养基中培养时，可产生大量的柠檬酸。而当该菌在赤藓醇发酵培养基中生长，则产生大量赤藓醇而非柠檬酸，且其赤藓醇产量与已报道的大部分其他微生物的赤藓醇产量相当。在本实验中，我们采用ARTP诱变系统对Y。 lipolytica SWJ-1b进行诱变，获得了一株高产赤藓醇的突变株M53，该突变株的遗传特征稳定。为了进一步提高M53的赤藓醇转化率，在本实验中，我们对菌种M53的赤藓醇发酵条件进行了优化研究。

2 材料与方法

2。1 菌株

本实验中的原始菌株为Y。 lipolytica SWJ-1b，该菌株分离自渤海海洋鱼类的肠道。菌株细胞保存在4℃的YPD斜面上，每月转接一次保持细胞活力。

2。2 培养基

酵母蛋白胨葡萄糖琼脂斜面（YPD斜面）：含酵母提取物（10 g/L）、蛋白胨（20 g/L）、葡萄糖（20 g/L）及琼脂（20 g/L）。

液体YPD培养基：含酵母提取物（10 g/L）、蛋白胨（20 g/L）及葡萄糖（20 g/L）。

生理盐水：称取0。9 g氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100 mL。

赤藓醇发酵培养基：葡萄糖100 g/L，(NH4)2SO4 2。3 g/L，MgSO4 7H2O 1 g/L，KH2PO4 0。23 g/L，酵母提取物1 g/L及NaCl 26。4 g/L。

本实验所用的所有试剂均为分析纯。

2。3 培养方法

2。3。1 Y。 lipolytica SWJ-1b的ARTP诱变

本实验所进行ARTP突变的具体步骤参照Lu等人描述的方法[26]。为得到Y。 lipolytica SWJ-1b的突变株，我们将该菌株在YPD中过夜培养至OD600=30，取50 μL的培养液，滴在灭过菌的不锈钢板圆盘（直径8 mm）上，在无菌环境中干燥几分钟。带有酵母细胞的金属圆盘随后用氦等离子体射流进行处理。该装置的氦气流量为10 SLM（升每分钟）和射频输入功率（RF）为120 W，获得一个适于处理酵母细胞的低温辉光放电等离子体射流，以确保在金属板表面的等离子体温度不高于40℃，通过ARTP处理Y。 lipolytica SWJ-1b细胞的时间为2 min。经处理后，金属板在含有1。5 mL灭菌生理盐水的EP管中振荡至少1 min，然后取200 μL的洗脱液，进行稀释后，涂布于YPD琼脂平板。在28℃培养3~4天后，获得单菌落，为突变株。这些突变体随后在赤藓醇发酵培养基中培养，筛选赤藓醇高产菌株。文献综述