3。4碳源浓度对菌种产菊粉酶的影响 11

3。5不同氮源对菌种产菊粉酶的影响 11

3。6氮源浓度对菌种产菊粉酶的影响 12

3。7初始PH对菌种产菊粉酶的影响 12

3。8温度对菌种产菊粉酶的影响 13

3。9时间对菌种产菊粉酶的影响 14

结    论 15

参 考 文 献 16

致 谢 18

1  前言

1。1  菊粉酶的概述

    菊粉(Inulin)是以β-1,2果糖苷键连成的多聚果糖。在还原末端有一个葡萄糖残基以蔗糖型糖苷键连接，呈直链结构，简写式为GFn[1]。聚合度大致为2~60。菊粉作为一种贮藏性多糖存在于菊芋（Jerusalem artichoke）、菊苣（chicory）等多种菊科植物的根和茎中，干重中含有超过70%的菊粉 。菊粉是一种廉价的糖源，被广泛应用于高果糖浆生产[ 2-6 ]，酒精发酵以及寡菊糖的生产[ 7 ]。

    菊粉酶是一种主要由微生物产生的葡糖水解酶，属于β-2果糖苷酶类[8]。菊粉酶可催化水解菊粉中的β-2,1-糖苷键产生果糖或者低聚果糖。菊粉酶水解菊粉生成多种水解产物，工艺比较简单且价格低廉，适用于商业化生产。因此，关于菊粉酶应用的研究开发逐渐受到科学家们的普遍关注[ 9-12]。

1。2  菊粉酶的分类

    按照作用方式的不同，菊粉酶可被分为外切型菊粉酶和内切型菊粉酶。外切型菊粉酶将菊粉链非还原性末端的果糖基逐个水解切下，可生产超高果糖浆。而内切型菊粉酶可以随机地水解菊粉内部的糖苷键产生以蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖为主的产物，生产功能性低聚果糖。文献综述

    按照细胞中分布的不同，菊粉酶可分为细胞外、细胞壁结合和细胞内酶三种类型。这三种类型的酶的分布随着菌种的不同而变化。另外，培养条件也影响菊粉酶的分布。培养基中碳源和培养温度的不同也会影响酶的分布。

1。3  分泌菊粉酶的微生物

     菊粉酶的来源普遍，很多植物都能产生菊粉酶。因为源于微生物的菊粉酶类别多，便于培养，产生的酶量高，所以商业化生产菊粉酶多来源于微生物。微生物中，酵母、丝状真菌和细菌能生产大量的菊粉酶。霉菌包括曲霉属（Aspergillus spp）、青霉属（Penicillium spp）。酵母菌有脆壁克鲁维酵母属（Kluyveromyces fragilis）、马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）和假丝酵母属（Candida spp）。细菌有假单胞菌属（Pseudomonas spp）、芽孢杆菌属（Bacillus spp）、葡萄球菌属（Staphylococcus spp）等[ 13-17 ]。和真菌及细菌相比，酵母菌能够生产更多的菊粉酶。在酵母菌中，金黄色隐球酵母（Cryptococcus aureus）和马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）可生产大量的菊粉酶以符合商业化需要。所以本实验选取马克斯克鲁维酵母作为研究对象。

2  材料与方法

2。1  菌株

    马克斯克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）（由实验室筛选并保存）。

2。2  培养基和试剂

2。2。1  培养基

    液体YPD培养基（种子培养基）：葡萄糖 2。0%（w/v），蛋白胨2。0%（w/v），酵母粉 1。0%（w/v），用蒸馏水定容到50mL，于121 ºC用高温灭菌锅灭菌20 min。