利用有益微生物防治植物病害始于1921年Hartely利用拮抗真菌防治猝倒病(Pythium debaryanum ,damping-off)[6]，1973年澳大利亚植物病理学家 Kerr 利用放射土壤杆菌（Agrobacterium radiobacter K84）成功防治植物根癌病，极大地促进了人们对生物防治植物病害的兴趣。从理论上讲任何能够降低植物病原微生物数量或致病性的微生物都具有生防潜能，因此，植物病害生防微生物涉及真菌、放线菌、细菌乃至病毒（噬菌体）等很多种群。自Kloepper等人1978年提出植物根围促生菌（Plant grow-promoting rhizabacteria PGPR）以来，PGPR迅速成为植物病害生物防治的一大热点[7]。由于根围是抵抗土传病害病原菌侵染的锋线，病原菌对根的初次和再次侵染的过程当中均要受到来自根围微生物的拮抗作用[8]。已报道的具有生物防治作用的PGPR分布于多个属内，其中主要有固氮菌属（Azotobacter）、肠杆菌属（Enterobacter）、节杆菌属（Arthrobacter）、文氏菌属（Erwinia）、芽孢杆菌属（Bacillus）、欧假单胞菌属(Pseudomonas)[9]。

    迄今为止，关于植物青枯病生物防治的报道已经多，生防因子也越来越宽泛，目前研究的热点仍然主要集中在无致病力的青枯劳尔氏菌内生细菌和根围促生菌这三大类[4]。在青枯病的生物防治中，研究较多的主要是芽孢杆菌、链霉菌以及假单胞菌[2]。此次实验我们主要是得到已经分离、纯化的枯草芽孢杆菌S9来诱导获得具有活性的S9菌株，与青枯菌T13在土壤环境条件下接种在番茄植株上的颉颃实验的反应来判断生防菌S9对番茄青枯病菌有无产生防病及促生效果，并对其定植菌量进行计数。

2。材料与方法

2。1 实验材料

（1）在农贸市场购买番茄种子，种子的规格如下：

    纯度     净度      发芽率    水份    种子类别   产地    作物种类    品种名称

   ≥97。0%   ≥98。0%   ≥85%    ≤8。0%  杂交种子   河北     番茄       中蔬四号

（2）生防菌（枯草芽孢杆菌S9）；

（3）病菌（青枯菌T13）；

（4）45孔穴盘若干个；

    （5）培养皿（若干），培养箱，旋涡器，烘箱，微波炉等

    （6）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（简称PDA）：马铃薯200g，琼脂15-20g，蔗糖/葡萄糖10-20g,蒸馏水1000ml；

（7）量筒,烧杯,移液枪，搅拌器,镊子，接种环,无菌培养皿,酒精灯等。

2。2 实验方法

2。2。1栽种番茄

    在45孔穴盘里放土，将以上番茄种子埋进格子间，并往每个盆栽格子盒浇水1000ml（500ml×2），耐心培养。

2。2。2配制培养基

PDA培养基：

（1）将买来的马铃薯（去皮）400g切成约1cm²的小块，加水放入电磁炉中大火煮沸后改小火煮，并持续30分钟，过程中用玻璃棒搅拌以防糊底；

（2）用双层纱布过滤，取其滤液并加20-40g葡萄糖，再补水至2000ml，自然PH；

（3）分装成5瓶，并在每瓶里装入6-8g琼脂；

（4）灭菌：将上述培养基于121。3℃湿热灭菌20min。

YGPA培养基：

（1）用料：酵母浸膏5g；葡萄糖10g；蛋白胨5g；琼脂15g；蒸馏水1000ml；

（2）YGPA培养基煮制过程与上文PDA培养基煮制过程相同；

（3）同样分装成5瓶；来`自+优-尔^论:文,网www.youerw.com +QQ752018766-

（4）灭菌：将上述培养基于121。3℃湿热灭菌20min。

2。2。3病菌的纯化与培养