(2)实验设备:电子天平、分光光度计、离心机、恒温水浴箱。
(三)测定方法
(1)网纹草叶片过氧化物酶(POD)含量测定方法
①标准曲线的制作:取6支20毫升具塞试管进行编号,按下表配制四邻甲基苯酚标准系列溶液,混合均匀后用1号试管调零,在470nm波长下测出吸光度(配比完成后所测数据已填入表中),以吸光度为纵坐标(Y),标准液浓度为横坐标(X)绘制标准曲线获得线性回归方程来;自]优Y尔E论L文W网www.youerw.com +QQ752018766-。
②POD的提取:取数片网纹草叶片洗净擦干,剪碎混匀后称取0。5g于研钵中,加少量石英砂、碳酸钙、适量蒸馏水,冰浴研磨成匀浆后再用蒸馏水定容至50mL,摇匀后离心,上清液即为待测液。
③POD活性测定:采用愈创木酚法进行测定。取6支20毫升具塞试管,3支测定管(重复),3支空白对照管。各加入酶液1。0mL。0。1%愈创木酚1。0mL。蒸馏水6。9mL,测定管加入0。18%过氧化氢溶液1。0mL,空白对照管加1。0mL蒸馏水,摇匀(计时),25度下准确反应10min,再加5%偏磷酸0。2mL终止反应。用标准曲线1号管调零,在分光光度计上测定3支测定管和3支空白对照管的A470。
④结果计算:从线性回归方程计算出对照四邻甲基苯酚的含量,按公式计算出结果。