摘要：莲藕多糖是莲藕中一种重要的生物活性大分子，是莲藕食药功能研究的切入点，具 有抗氧化、免疫调节、降血糖和抗疲劳等功效。本课题以水提法从莲藕中提取莲藕多糖

（LRS），以 LRS 刺激 RAW264。7 细胞建立体外炎症模型，研究莲藕多糖对巨噬细胞 MAPKs 及 PI3K-AKT 信号通路的影响。以半定量 RT-PCR 法检测细胞液中 TNF-、 iNOS、COX-2 mRNA 的表达量；以 Western Blot 法检测 AKT、p-AKT、IBa、p-IBa、 p-ERK、ERK、p-JNK、JNK、p-p38 、p38 及核内 p65、c-fox、c-Jun 水平。数据显示， LRS 可以上调相关炎症基因 mRNA 的表达水平，，提高 p38 、IBa 的磷酸化水平。91079

毕业论文关键词：莲藕多糖，炎症因子 ，巨噬细胞，免疫调节

Abstract: Lotus roots polysaccharides(LRS) is a kind of important macro-molecular material in lotus roots, and is the pointcut of researching lotus roots, with the activity of anti-oxidation, immune regulation,anti-diabetics and anti-tumor。 In this topic, extracted LRS was used to stimulate RAW264。7 cells and the inflammation model in vitro was set up, This study was aimed to investigate  the  LRS  on  RAW264。7  cells  MAPKs  and  PI3K-AKT  signaling  pathway。 Semi-

quantitative RT-PCR was used to test the levels of mRNA expression of inflammatory mediators。 The levels of AKT,p-AKT,IBa,p-IBa,p-ERK,ERK,p-JNK,JNK,p-p38 ,p38 and actin were examined by western blot。 The activity of p65,c-fox and c-Jun were examined by Luciferase。 The result shows that LRS suppresses the mRNA expression of inflammatory genes in macrophages and the level of phosphorylation of p-38 and IB。

Key word:  Lotus Roots Polysaccharides; inflammatory factor; macrophage; immune regulation

目录

1 前言 6

1。1 莲藕多糖 6

1。1。1 莲藕多糖的药理作用 6

1。1。2 莲藕多糖的抗氧化活性研究 6

1。2 炎症 6

1。2。1 炎症反应 6

1。2。2 巨噬细胞 7

1。3 多糖免疫调节的信号转导机制 7

2 材料与方法 8

2。1 材料与试剂 8

2。1。1 实验试剂 8

2。1。2 实验仪器 8

2。2 细胞培养及传代 9

2。3 RT-PCR 检测 mRNA 表达水平 9

2。3。1 细胞总 RNA 的提取 9

2。3。2 PCR 扩增 9

2。4 Western Blot 测定促炎因子及通路蛋白表达 10

2。4。1 总蛋白的提取 10

2。4。2 核蛋白的提取 11