2. 仪器与材料

2.1 仪器

Agilent7890A－5975C气相色谱—质谱联用仪，配备DB－17毛细管柱(60m×0．25mm×0．25um)；电子分析天平(BS224 S，北京赛多利斯仪器系统有限公司)；RE-52B旋转蒸发器（RE-3000,上海亚荣生化仪器厂）；循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；低温冷却液循环泵（郑州长城科工贸有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（DHG-9240A型，上海精宏实验设备有限公司）；水浴锅（江苏金坛市亿通电子有限公司）。

2.2 试剂与试药

三氟乙酸(TFA，化学纯，上海强顺化学试剂有限公司)；盐酸羟胺(AR分析纯，宜兴市亚盛化工厂)；吡啶（AR分析纯，中国医药（集团）上海化学试剂公司）；甲醇(AR分析纯,南京化学试剂有限公司)；乙酸酐(AR分析纯，无锡县化学试剂厂)；三氯甲烷（AR分析纯，南京化学试剂有限公司）。

2.3 原料

小麦麸皮多糖（淮麦 33），L-鼠李糖（中国药品生物制品检定所），D-阿拉伯糖（中国药品生物制品检定所），D-木糖（上海试剂工厂），D-甘露糖(中国药品生物制品检定所)，D-葡萄糖(中国药品生物制品检定所)，D-半乳糖（中国药品生物制品检定所）。

3．实验方法与结果

3.1 多糖的水解：

取40mg多糖样品，放入10ml旋转蒸发瓶，加入4mol/L的三氟乙酸(TFA)4ml，封口,在110℃条件下水解6h，水解完毕后，冷却，40℃减压旋转蒸发浓缩至干，再加甲醇浓缩至干，重复操作3-4次以除尽TFA[9, 10]。

3.2 单糖对照品的衍生化

制备单糖衍生化对照品，其反应原理是：糖和盐酸羟胺在吡啶中加热反应生成糖肟，再加入醋酸酐作为乙酰化试剂，在加热条件下继续反应，则会生成具有挥发性的糖腈乙酸酯衍生物[11]。分别精密称取L-鼠李糖,D-阿拉伯糖,D-木糖,D-甘露糖,D-葡萄糖,D-半乳糖[12]各10mg于安瓿瓶中，加入12mg盐酸羟胺，再加入0.6mL吡啶，封口，于90℃下恒温水浴30min，并不时振荡，取出冷却至室温；后加入0.6mL乙酸酐，封口，于90℃恒温水浴30min，并不时振荡，冷却至室温；于50℃减压旋转蒸干[13]；再加入4mL三氯甲烷溶解，4000r/min离心5min，取上清液，过0．22m微孔滤膜，备用[14]。留待GC-MS分析产物。 

3.3 样品单糖乙酰化衍生物的制备

在水解样品中加入12mg盐酸羟胺，再加入0.6mL吡啶，封口。将上述备用样品按照3.2方法进行衍生化，留待GC-MS分析产物。在衍生物制备时要求样品干燥且需防止水分的进入。所以，多糖样品水解后必须进行干燥才能进行衍生反应。同时随着水解、干燥、有机溶剂再溶解等操作环节的增加，会使样品中的一些微量组分损失，从而导致不检出或测量误差[15]。

3.4 气相－质谱联用法分析单糖组成

3.4.1 气相－质谱分析条件

气相色谱条件: HP －5 MS 毛细管色谱柱(Agilent 30 mm × 0.32 mm i． d， 0.25 μm)，检测器温度 230 °C， 进样口温度250 °C， 程序升温:初始温度 80 °C， 以 15 °C·min-1 升至 170 °C， 保持 4  min， 以 2.5 °C·min-1 升至 200 °C，以 20 °C·min-1 升至 250 °C， 保持 6.5  min。载气为高纯度氦气(99． 999 %)， 柱前压 7.65 psi，进样量0.5 μl， 分流比 20∶ 1; 载气流速 1.0 ml·min-1[16] 。

质谱条件:离子源为 EI 源;离子源温度 250 °C; 电子能量 70 eV;四极杆温度150 °C;发射电流 34.6 μA, 质量范围 50 ～600 amu;溶剂延迟 5 min。

出峰结果不理想，峰形过于紧密，分离度不理想。

3.4.2气相－质谱分析条件优化

气相色谱条件:HP－5MS毛细管色谱柱(Agilent30 mm × 0.32mmi．d，0.25 μm)，检测器温度280 °C，进样口温度250 °C，程序升温:初始温度80 °C，以20 °C •min-1升至170 °C，保持2 min，以2．5 °C •min-1升至240 °C，以10 °C •min-1升至280 °C，保持7 min。载气为高纯度氦气(99．999 %)，柱前压7．65 psi，进样量0．5L，分流比20∶1，载气流速1．0 ml•min-1。