1。2。1。3 A549细胞的传代 8

1。2。1。4 葛根素的处理 9

1。2。2  倒置相差显微镜观察细胞形态 9

1。2。3 细胞划痕试验观察细胞的迁移情况 9

1。2。4  含葛根素素的细胞培养液上清氧化活性水平检测 9

1。2。5 流式细胞仪检测细胞周期 10

1。2。6  数据分析 10

2结果 11

2。1 葛根素对体外A549细胞生长的抑制作用 11

2。2 细胞划痕实验观察葛根素对A549细胞迁移的影响 11

2。3 DPPH自由基清除活性试验测P清除率 11

3。4细胞周期分布的检测 11

3讨论 13

谢辞 14

参考文献 15

附录 17

引 言

肺癌： 肺癌是一种广为人知恶性肿瘤,它已经逐渐成为全球死亡率最高的癌症。[1]很多肺癌确诊时已经为中晚期，而且大多伴随远处转移,生存率较低，其5年生存率仅大约为15%。[2]根据临床病理特征,人们将肺癌被分为两类：非小细胞肺癌和小细胞肺癌[3],他们的发病率分别占总发病率的85%和15%[10]。近些年，非小细胞肺癌中的肺腺癌成为最常见、发病率最高的肺癌 [4, 5]。在 I 期肺腺癌患者中五年存活率约为50%，在 III 期患者中五年存活率却低于10% [6]。可见,  很有必要进一步研究肺腺癌的生长和代谢机制。因此降低肺癌死亡率的一个关键是研究肺腺癌的治疗。论文网

A549细胞：A549细胞系属于人肺腺癌细胞系，A459细胞一开始来源于II型肺泡上皮细胞,从1972就开始在体外连续培养，[7]。它不但具有肺腺癌细胞的典型恶心特征[8]，还具有一般II型肺泡上皮细胞形态特性[9]。因此，A549 细胞不仅用于分析体外研究II型肺泡上皮细胞的生长、分化、凋亡[6]，而且也用于体外研究肺腺癌治疗，是一种广泛应用的良好模型[7, 8]。

细胞周期：细胞周期是细胞连续分裂成子细胞的过程，这个过程是，真核细胞从第一个有丝分裂结束到第二个有丝分裂结束的全过程。它分为分裂间期和分裂期两个阶段。分解间期又分为NA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。细胞周期是一个细胞物质积累与细胞分裂的循环过程，它的长短反映了细胞所处状态。癌变的细胞以及特定阶段的胚胎细胞常常有异常的分裂周期。

葛根素：葛根素( Puerarin 普乐林)也称葛根黄素，是从豆科属植物葛根中的提取的有效成分,高含量为白色针状结晶粉末， 化学名为4’,7- 二羟基- 8- BD-葡萄糖异黄酮。经过大量的研究与实验证明葛根素具有退热、镇静,扩张冠状动脉, 改善心肌收缩功能, 保护急性心肌出血，保护全心缺血心肌, 使冠状动脉血流量增加的作用。补充些葛根素与肿瘤相关的研究，如果没有，可以引出问题，即“目前，关于葛根素对肿瘤尤其是肺癌的研究甚少，本研究拟利用A549细胞为模型，研究葛根素对肺癌增殖、迁移的影响，以及其分子机制。”

1材料与方法

1。1材料

1。1。1器材

二氧化碳培养箱（日本三洋公司）

超低温冰箱（德国西门子公司）