医用超净台（苏净集团安泰公司）

自动高压灭菌器（zealway，美国）

易普易达超纯水机（南京易普易达有限公司）

FA1104 电子天平（上海天平仪器厂）

电子恒温水浴锅（黄骅市综合电器厂）

Primor冷冻离心机（北京医用离心机厂）

磁力搅拌器(绍兴市卫星医疗设备股份有限公司)

倒置显微镜（Leica，德国）文献综述

酶标仪（BioTek，美国）

1。1。2材料

连续培养的A549细胞株（实验室提供）

葛根素(实验室提供)

24孔细胞培养板（Becton Dickinson, USA）

一次性培养皿（BECTON DICKINSON, USA）

胰酶（AMRESCO分装）RPMI 1640培养粉（INVITROGEN）

5mol/L EDTA（实验室提供） 胎牛血清（Gibco公司）二甲基亚砜（DMSO）（AMRESCO分装）

PBS （磷酸缓冲液）

1。1。3试剂

（1）10× PBS储存液 ：

    Na2HPO4·12H2O       28。9g

    NaCl                 80。0g

    KCl                   2。0g

    NaH2PO4               2。0g

    用DDW定容至1000ml。

1×PBS应用液：将制好的10×PBS储存液稀释10倍，高压灭菌后培养细胞用。

(2) 0。25%胰酶消化液（50mL)

1、取出0。5%胰酶原液和0。5mol/L EDTA在室温下解冻，

2、取。0。25mol/L EDTA1 mL，

3、取1×PBS应用液24mL，

4、取0。5%胰酶原液25mL，

5、将所有溶液混匀，

6、取2ml做无菌试验，

7、于4℃保存。

(3) RPMI 1640细胞培养液

1640原液：

1、取1640粉一袋10。4克，

2、加入800mL三蒸水，在磁力搅拌器上搅拌约4小时，

3、待其充分溶解后，加入2克NaHCO3 ,继续搅拌约1小时，量筒定容至1000mL，4、用1M HCL调PH值。加入大约26滴HCL，用PH试纸测ph约7。1～7。2即可（颜色呈枣红色），

5、加庆大霉素（按1ml培养液加2ul庆大霉素）。抽虑灭菌，来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

6、并移取3mL于小瓶中，37℃温箱培养做无菌试验，

7、原液放在4℃保存。

（4）1640应用液：

1、将灭活的胎牛血清在4℃水浴中融化，

2、取1640原液，加入10％的小牛血清，做无菌试验，

3、于4℃保存。

（5）胎牛血清应用液

1、取出胎牛血清原液于4℃水浴融化，

2、在56℃恒温水浴0。5小时灭活，分装至小瓶，

3、把小瓶于－20℃冰冻保存。

（6）消毒液

1、新洁尔灭消毒液：以新洁尔灭与水1：50配制

2、75%酒精：95%酒精与三级水以79：21配制

（78） DPPH（0。2mM）

1、称取20mg的DPPH，

2、向其中加入乙醇使其溶解，

3、用250ml的容量瓶定容，

4、放置−20 ℃冰箱中保存备用

（8） BHT （抗氧化剂二丁基羟基甲苯）

 1、称取0。01g的BHT，

 2、向其中加入乙醇使其完全溶解，

 3、用100ml的容量瓶定容，

 4、放置−20 ℃冰箱中保存备用。

1。1。4化合物

葛根素由实验室提供，其分子式和结构如下图所示，将其溶解在DMSO溶液中制成原液，浓度为100 mM。根据实验需要，用1640培养液稀释成浓度为100μM、200μM的贮液