何自强[7]以黄芩为原料、甲醇为提取剂,采用醇提酸沉法从黄芩中提取黄芩苷.通过单因素试验和正交试验探讨了甲醇浓度、提取温度、提取时间、料液比4个醇提条件对黄芩苷提取率的影响,结合直观分析和方差分析,确定最佳提取条件:甲醇浓度为65% ,提取温度为80℃ ,提取时间为2.5h ,料液比为1∶10 ,黄芩苷提取率可达到23.03%.该方法提取率高,纯度高,重现性好.
杜守颖等[8]研究闪式提取黄芩中黄芩苷的最佳工艺条件。方法以提取液中黄芩苷的含量为指标,采用正交试验设计,对闪式提取的影响因素进行考察,并在提取率、提取时间、耗电量等方面与文献报道的方法进行比较。结果闪式提取的最佳工艺是:将黄芩置于100℃沸水中浸泡10 min后,目的是杀酶保苷,过滤,加入65%乙醇20倍量,闪式提取2 min,将浸泡液及提取液合并。采用闪式提取黄芩中的黄芩苷,不但提取率高,与煎煮法、回流法相比更有操作简便、节能经济的优势,这为中药黄芩的开发利用提供参考。
郑艳红等[9]采用单因素试验,对黄芩苷制备工艺的影响因素进行了考察。以提取液中黄芩苷含量和出膏率为评价指标,考察了提取工艺中提取方法(回流提取法、超声提取法和微波提取法)、提取溶剂(水和乙醇)、提取温度(60,70,80,90 ℃)、料液比(10,15,20 倍)、提取次数(1,2,3 次)等因素对黄芩苷提取效果的影响;以精制品中黄芩苷含量及收率为评价指标,考察了酸沉 pH(1。0,1。5,2。0)、酸沉保温时间(15,30,60 min)、静置时间(3,6,12,18 h)及洗酸次数(0,1,2,5 次)对黄芩苷精制的影响,确定纯化工艺中各因素最佳水平。
赵兰芬等[10]改进不同剂型清开灵中黄芩苷的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent TC-C18柱(150 mm×4。6 mm,5μm);流动相为水-甲醇-冰醋酸(体积比55∶45∶1);检测波长为274 nm;流速为1 mL。min-1。结果黄芩苷的质量浓度在0。01057~0。2114 mg。mL-1范围内与峰面积线性关系良好,r=0。9999;精密度、重复性、稳定性及加样回收率结果均能满足分析要求。结论本法可行、准确,可为不同剂型清开灵药品的标准修订提供依据。
3 毛细管电泳与牛血清蛋白
牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。 等电点4。8。含氮量16%,含糖量0。08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0。2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在 动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白 蛋白( BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种球蛋白,包含583个 氨基酸残基,分子量为66。430 kDa,等电点为4。7。
BSA通常用作稳定剂以限制酶或修饰酶的保存溶液和反应溶液,因为一些酶在低浓度下是不稳定的或活性低的。 加入BSA后,可能发挥“保护性”或“载体”的作用,许多酶可以在BSA的活性大大提高后加入BSA。
一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。
在毛细管电泳系统中,带电溶质在电场作用下发生定向迁移,其表观迁移速度是溶质迁移速度与溶液电渗流速度的矢量和。所谓电渗是指在高电压作用下,双电层中的水合阴离子引起流体整体地朝负极方向移动的现象;电泳是指在电解质溶液中,带电粒子在电场作用下,以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移的现象。溶质的迁移速度由其所带电荷数和分子量大小决定,另外还受缓冲液的组成、性质、pH值等多种因素影响。带正电荷的组份沿毛细管壁形成有机双层向负极移动,带负电荷的组分被分配至毛细管近中区域,在电场作用下向正极移动。与此同时,缓冲液的电渗流向负极移动,其作用超过电泳,最终导致带正电荷、中性电荷、负电荷的组份依次通过检测器。